内窥镜中检测hbv的pcr技术与elisa方法比较

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1、内窥镜中检测HBV的PCR技术与ELISA方法比较游洁王金明(湖北省黄石市疾病预防控制中心湖北黄石435003)【中图分类号】R446【文献标识码】B【文章编号】1672-5085(2009)18-0092-02【摘要】目的比较PCRHBV-DNA和ELISAHBsAg两种检测方法在检测内窥镜中HBV的检测情况，从而确定木次研究的试验方法。方法现场采集内窥镜各关键部位(镜身、孔道、活检钳)的样品207份，平均分成两份，按各自所用试剂盒的要求分别进行试验，比较两种试验的阳性检击率、一致性等试验评价指标。结果PCRHBV-DNA阳检率为27.54%、ELISAHBsAg阳检率为2.42%,经

2、χ2检验，χ2=4.63P=0.031、一致性检验,kappa=0.089ZP=0.008,由此说明两种检验方法在内窥镜中痕量的HBV的检测过程中有显著性差异。结论PCRHBV-DNA对与内窥镜中痕量的HBV的检测试验方法优于ELISAHBsAg方法，在木次调查研究中应该采用PCRHBV-DNA的检测方法。[Abstract]Objectives:ComparePCRHBV-DNAwithELISAHBsAgmethodinHBVontheendoscopes,Inordertodeterminetheinvestigativeexperiment.Methods：Com

3、parewiththepositivedetectablerateandtheconsistencyindices(kappa)betweenthetwoexperimentsin207samples.Results：ThepositiveexaminerateofPCRHBV-DNAis27.54%,ButELISAHBsAgisonly2.42%,Therearesignificantdiffereneebetweenthetwomethods(x2=4.63P=0.031andkappa=0.089P=0.008).Conclusions：PCRHBV-DNAmethodcanbe

4、UsedinthisresearchtoevaluatethedisinfectanteffectoftheendoscopesinHuangshicity.随着人们对乙型肝炎病毒(HBV)的深入研究，对与血清中的HBV的检测方法也日臻完善，主要有基于免疫学ELISA的HBVM(乙肝病毒感染标志物)检测和基于分子牛物学PCR的HBV-DNA(乙型肝炎病毒基因组)检测。两种方法各有优劣，PCR方法灵敏高，但仪器和操作要求较高，所用检测成木也较高;ELISA方法试验条件要求不高、方便、便宜，但对于痕量HBV的检测容易出现假阴性。本文旨在通过对内窥镜中痕量HBV的检测进行分析，确定黄石地区各医

5、疗单位HBV污染内窥镜的调查吋所应采用的最佳检测方法。具体如下：1材料与方法1.1样品采集、处理由黃石市疾病预防控制中心的专业监测人员在各医疗单位当天所使用的内窥镜检查完2/3数量的病人吋按常规操作对全市各级医院内窥镜的镜身（含镜头）、活检钳、内镜孔道等主要部位进行釆样：①内镜镜身、镜头表面：用浸有无菌中和剂（0.5%硫代硫酸钠+1.0%甘氨酸、1.0%吐温、0.1%卵磷脂的0.03mol/LPBS,以下类同）的棉签,于表面100cm2反复涂抹10次，无菌操作条件下将棉签采样部位剪入5ml含无菌中和剂试管中，振打80次，作为样液。②活检钳：无菌操作条件下将活检钳直接放入10ml含中和剂的

6、无菌盐水试管中，开关活检钳瓣，振荡洗脫30秒，取出活检钳，作为样液。③内镜孔道：无菌操作条件下用无菌注射器吸取10ml含无菌中和剂采样液，从活检钳孔口注入，用无菌的带塞试管在活检出口接收流出液，作为样液。1.2乙型肝炎病毒检测所得上清液应用PCR法检测HBV・DNA,HBV-PCR荧光定量检测试剂盒为深圳匹基生物工程股份有限公司产品，所用仪器为RocheLightCycler实时荧光基因扩增仪（瑞士）。同份样品用ELISA法检测乙型肝炎表面抗原（HBsAg）,ELISA试剂盒为上海科华生物工程技术公司产品。两种检测的操作方法及判断结果均严格按产品说明书进行。1.3结果判断ELISA检测的

7、吸光度大于阳性对照的为阳性结果，PCR检测的拷贝数大于l×103copies/ml为阳性结果2结果与讨论2.1内窥镜不同部位HBsAg与HBV・DNA的检测结果为207份样品中用PCR方法检测出镜身阳性24份，阳性率为32.88%孔道15份，阳性率为25.42%活检钳18份，阳性率为24%,HBV-DNA检测阳性率为27.54%;而用ELISA方法测出镜身阳性1份，阳性率为1.37%孔道3份，阳性率为5.08%活检钳1份