【硕士论文】熊果苷的制备研究.pdf

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1、摘要熊果苷(Arbutin)化学名称为对羟基苯一13一D-吡喃葡萄糖苷(p-Hydroxyphenyl·13一D—glucopyranoside)，最早发现于熊果叶中。熊果苷最初应用于药物中，有抗菌消炎的作用。自上世纪80年代，研究发现熊果苷作为酪氨酸酶的竞争抑制剂，能抑制黑素形成过程中关键酶酪氨酸酶的活性，因此有美白的效果。日本资生堂公司首先将熊果苷应用于美白化妆品中，目前国内外也有多家厂商将熊果苷添加于美白类化妆品中。熊果苷有很大的市场应用前景。本文对熊果苷的合成及其检测作了研究，主要内容如下：1)建立了熊果苷高效薄层色谱(TLC

2、)定性分析方法。薄层层析硅胶GF254为固定相，乙酸乙酯一甲醇一水(7-2一l，v／v／v)为展开剂，熊果苷和氢醌的Rf值分别为O．56和O．67。2)建立了化妆品和酶反应体系中熊果苷含量的反相高效液相色谱(I-tPLC)定量分析方法。建立了一套有效的萃取膏霜类化妆品中熊果昔的预处理方法，主要采用了氯仿～饱和氯化钠溶液(2：1，v／v)超声振荡萃取。高效液相色谱条件为固定相ApolloC18分析柱(250ram×4．6mm，5pm)，流动相为甲醇一磷酸缓冲液(pH6．o)～冰醋酸(10：90：1，v／v／v)，检测波长为254nm。熊

3、果苷的保留时间为5．2min，氢醌的保留时间为7．9min，达到基线分离。熊果苷的线性方程为A=175543x+1763．1，P=0．9959，线性范围为0．Ol～lg／L，最小检测限为24ng，加样回收率为96．15％：氢醌的线性方程为A=16772x一3380．8，P=o，9957，线性范围为O．01～lg／L，最小检测限为21ng。3)进行了以NaHC03为催化剂利用相转移催化反应合成熊果苷的中间体五乙酰熊果苷的研究。通过相转移催化剂溴化四丁基铵(TBAB)，合成了关键中间产物五乙酰熊果苷，避免使用了昂贵及对环境污染严重的金属盐

4、催化剂。整个反应的收率达到37．5％。4)对合成得到的熊果苷样品进行了结构鉴定研究。对样品的红外光谱、电喷雾质谱、核磁共振氢谱和核磁共振碳谱进行分析研究，对上述图谱的特征峰均作了较好的归属。5)进行了糖苷水解逆反应生物催化剂的筛选研究，首次发现杏仁糖苷酶可用于熊果苷的合成。进行了从土壤中筛选具有糖菅水解酶菌株的初步研究。从杏仁种子中提取了杏仁糖苷酶，并且对其活力进行研究。对筛选得到的糖苷酶的耐温度以及有机溶剂的耐受性进行研究，研究结果显示从杏仁中得到的杏仁糖苷酶可用于熊果苷的合成。6)进行了杏仁糖苷酶催化糖苷水解逆反应合成熊果苷的初步

5、研究。利用从杏仁中提取的糖苷酶在90％的叔丁醇水溶液中进行了合成熊果苷的尝试，并对影响反应的因素作了初步研究。关键词：熊果苷相转移催化糖苷酶合成IIABSTRACTArbutin．namedP-Hydroxyphenyl-目一D-glucopyranoside，firstlyisfoundintheleavesofArctostapylosBearberry．Arbutinhadbeenusedinmedicinebecauseofitsanti—inflammationandanti—bacterialactions．Since19

6、80s，researchessuggestedthatarbutincouldinhibitreversibletheactivityoftyrosinaseasacompetitiveinhibitor．Tyrosinaseisthekeycatalystinacceleratingtheformationofmelanin．Sothearbutinhadtheeffectofskinwhitening．Becauseofinhibitionoftheformationofmelanin，SHISEIDOCompanyfirstap

7、pliedarbutinincosmetics．Manydomesticcompaniesalsoaddedarbutinintowhiteningcosmetics．Sothearbutinhadthepromisingapplicationwimagreatdemand．Themaincontentsofthiswereasfollows：paper1)Thethinlayerchromatographic(TLC)methodstOqualitativelyanalyzearbutinwasdeveloped．Theoptima

8、lconditionsofTLCwereaSfollows：silicagelGF254aSstationaryphase，ethylaerate·methanol—water(7—2一l，v}v∽aSmobilepha