乌司他丁对失血性休克大鼠肺损伤保护作用

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1、硕士学位论文乌司他丁对失血性休克大鼠肺损伤的保护作用硕士研究生：刘朋指导教师：林春水副教授摘要失血性休克是临床常见的危重症之一．肺往往是最先受累的器官。失血性休克并发急性肺损伤(acutelunginjury，ALI)的死亡率达40％。内毒素移位、细胞因子合成释放、中性粒细胞(polymorphonuclearneutrophils，PMN)激活等环节可能在失血性休克所致组织损伤中发挥重要作用。肺内炎症反应失控和缺血／再灌注损伤是构成创伤失血性休克后ALI的主要机制。白细胞尤其是中性粒细胞(PMN)既是引发全身炎症反应综合征的主要细胞又是缺血／再

2、灌注损伤主要参与者，成为介导休克后肺损伤的主要效应细胞。如何早期抑制PMN的趋化、黏附，减少其氧自由基、蛋白酶和溶酶体酶的产生，减轻机体炎症反应，从而预防ALI的发生显得尤为重要。乌司他丁(Ulinastatin，UTI)是一种来源于人体的高效广谱的水解酶抑制剂，对胰蛋白酶、纤溶酶、中性粒细胞弹性蛋白酶具有较强的抑制作用。UTI本身来源于人体，无免疫原性，安全性高，应是一种较理想的外源性蛋白酶抑制剂。UTI被广泛用于急性胰腺炎的治疗，近年来其脏器保护作用成为研究热点。既往研究显示UTI对内毒素等因素所致ALI有保护作用，但此类研究大多集中于感染性

3、休克等模型，有关UTI对失血性休克所致肺损伤的作用研究较少。本研究采用失血性休克模型，通过测定肺组织超氧化物歧化酶(superoxidedismutase，SOD)、丙二醛(malondialdehyde，MDA)、血红素氧化酶一1(hemeoxygenase-l，HO．1)和肺叶湿／干重比(wettodryweightratio，W／D)，并观察肺组织病理学改变，探讨UTI在失血性休克所致肺损伤的保护中文摘要作用。材料和方法l、动物与分组成年雄性SD大鼠24只，SPF级，体重350"-一4509，由广东省医学实验动物中心提供。随机分为3组：假手

4、术对照组(C组)、失血性休克组(H组)和乌司他丁治疗组(U组)，每组8只。2、动物模型建立及复苏3％戊巴比妥钠50mg／kg腹腔注射麻醉成功后，行左侧股动、静脉插管术，分别用于有创动脉压监测和补液。C组仅行上述操作，全程旷置作为基础水平对照。另两组上述操作完成后观察10min，待循环稳定后经股动脉匀速放血，10min内使平均动脉压(meanarterialbloodpressure，MAP)降至40-a：5mmHg，并间断回输或放血维持此血压。U组在休克维持60rain时经股静脉注射UTI50000U／kg(溶于生理盐水)；H组则注射等量生理盐水

5、。休克维持60min后完成失血性休克模型制作，随后回输全部失血及等量的乳酸林格液进行复苏，所有液体均于30min内输完。复苏后4h快速放血处死动物，取左肺切成直径约lcm小块投入液氮中，再转移至．80℃冰箱冻存备检。3、观察指标3．1肺组织SOD活力和MDA含量测定SOD活力采用黄嘌呤氧化酶法测定，MDA含量采用硫代巴比妥酸法测定。试剂盒均由南京建成生物工程研究所提供，测定方法按试剂盒说明书操作。3．2肺组织HO．1的测定采用Western．blot法测定。用HO．1蛋白带的灰度峰值与对应的13-actin灰度峰值之比代表HO．1的表达量。3．3

6、肺组织W／D比值测定取右肺上叶，滤纸吸干肺表面水分，精确称重后放入烤箱72h(60℃)，测定W／D比值。3．4肺组织病理学检查取右肺中叶，4％多聚甲醛浸泡固定，常规石蜡包埋切片，HE染色，光学显微镜(Olympus公司，X200)观察肺组织病理学改变。n硕士学位论文4、统计学处理采用SPSSl3．0统计软件进行处理，所有计量资料以均数士标准差(；蝴)表示。先行方差齐性检验，采用完全随机设计的方差分析或Welch法检验，多重比较采用LSD法或DunneR’ST3法，P<0．05为差异有统计学意义。结果1、一般情况：三组动物体重及基础MAP差异无统计

7、学意义(P=0．730；P=0．859)。H组和U组放血量差异无统计学意义(P=0．850)。2、肺组织SOD活力及MDA含量各组SOD活力比较有统计学差异(P=0．000)；H组和U组SOD活力较C组显著降低(P=0．000；P=0．000)，但U组显著高于H组(P=0．003)；各组MDA含量比较有统计学差异(P=O．000)H组和U组MDA含量较C组显著增高(P=0．000；P=0．011)，而U组显著低于H组(P=0．000)。3、肺组织HO．1表达及W／D比值各组HO．1表达比较有统计学差异(F=151．446，P=0．000)H组和U

8、组HO．1表达较C组显著增高(P=0．000；P=0．000)，而U组显著低于H组(P=O．000)。各组W／D比值比较有统计学差异(F