人脐带间充质干细胞向视网膜色素上皮细胞分化的研究

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2、中特别加以标注和致谢等内容外，文中不包含其他人己经发表或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。研究生签名：企哉导师签章：沙7q年≥月乙6日目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯4研究论文人脐带间充质干细胞向视网膜色素上皮细胞分化的研究前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·7日IJ舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。／材料与方法⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯8结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯16附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·18讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·19结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯27参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯27综述干细胞向视网膜色素上皮细胞诱导分化的研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯31致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯38个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

4、⋯⋯⋯⋯⋯⋯39中文摘要人脐带间充质干细胞向视网膜色素上皮样细胞分化的研究摘要视网膜色素上皮(Retinalpigmentepithelium，RPE)，位于视网膜的最外层，为单层立方或矮柱状细胞。色素上皮来源于胚胎时期的神经外胚层，为光感受器细胞提供必需的营养并起到支持和保护的作用，同时为维持视网膜和感光细胞的正常生理功能提供多种营养因子。视网膜变性等损伤性疾病将导致视觉功能的损伤，尤其是视细胞的丢失将导致视觉功能的永久丧失。再生医学的发展使移植恢复视觉功能成为希望。近年来，学者将研究重点放在了视网膜细胞的移植上

5、，特别是视细胞和视网膜色素上皮细胞的移植。各国学者先后应用胚胎干细胞(embryonicstemcells，ES)、诱导性多能干细胞(inducedpluripotentstemcells，iPS)和成体干细胞中的脂肪来源干细胞诱导分化形成视网膜色素上皮样细胞，由于在培养过程中应用到了动物来源的血清、饲养层细胞、重组蛋白和营养因子，容易引起免疫反应，因此这些细胞的临床应用受到限制。在前期的研究中，我们在将ES诱导分化为视细胞的过程中外源性的添加了小分子化合物，没有使用动物来源的血清、生长因子和胚胎成纤维细胞饲养层，

6、将此种方法诱导形成的视细胞进行移植实验，未发现有移植排斥反应，并且细胞与宿主细胞的融合较好。这种诱导方法使视细胞移植的临床应用成为可能。人脐带Wharton胶来源的间充质干细胞(humanWharton’Sjelly．derivedmesenchymalstemcells，HWJ．MSCs)又称为脐带间充质干细胞(humanumbilicalcordmesenchymalstemcells，huc．MSCs)，多项研究显示，、该细胞增殖和诱导分化能力很强；来源广泛且采集方便；不受道德伦理制约，是白体细胞移植和异体细

7、胞移植治疗的理想种子细胞。与同样属于成体干细胞范畴的骨髓间充质干细胞(bonemarrowmesenchymalstemcells，BM．MSC)相比，脐带间充质干细胞在取材上不受疾病、年龄等限制。脐带间充质干细胞在细胞移植的临床应用中具有更大优势。因此，本研究通过实验研究旨在探索相对成熟、稳定的体外分离培养、诱导脐带间充质干细胞向视网膜色素上皮样细胞分化的方法，为其最终应用于临床治疗提供实验依据。中文摘要目的：在直接共培养体系中共培养SD大鼠睾丸支持细胞和人脐带间充质干细胞，探讨huc．MSCs向视网膜色素上皮细

8、胞诱导分化的可行性，并对诱导分化的视网膜色素上皮细胞进行生物学特性鉴定，为后续的视细胞分化研究提供技术方法和实验基础。方法：1已鉴定huc．MSCs的传代培养：常规培养经过鉴定的huc．MSCs。倒置显微镜观察细胞形态，选取第三代细胞进行共培养。2SD乳鼠睾丸支持细胞(sertolicells，SCs)的原代培养：选取19-v21天龄的SD大鼠分离睾丸，低渗