葫芦素b对人神经母细胞瘤sh-sy5y细胞增殖和凋亡的影响及机制研究

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1、分类号学号M201171530学校代码10487密级___________硕士学位论文葫芦素B对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞增殖和凋亡的影响及机制研究学位申请人:刘伟伟学科专业:生物化学与分子生物学指导教师:陈明洁副教授答辩日期:2014年1月19日万方数据AThesisSubmittedinPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheMasterDegreeofScienceEffectsofCucurbitacinBoncellproliferationandapoptosisinhumann

2、euroblastomaSH-SY5YcellsCandidate:WeiweiLiuMajor:BiochemistryandMolecularBiologySupervisor:Assoc.Prof.MingjieChenHuazhongUniversityofScienceandTechnologyWuhan430074,P.R.ChinaJanuary,2014万方数据独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除文中已经标明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或

3、撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权华中科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□，在_____年解密后适用本授权书。本论文属于不保密□。（请在以上方框内打“√”）学位论文作

4、者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月万方数据华中科技大学硕士学位论文摘要神经母细胞瘤(Neuroblastoma，NB)是一种胚胎性恶性肿瘤，是儿童最常见的颅外实体肿瘤之一。神经母细胞瘤在婴幼儿中的发病率及死亡率高，预后差。目前为止，尚未有十分行之有效的治疗方法。葫芦素B(cucurbitacinB,CuB)是一种中药，具有抗肿瘤、保肝、提高机体免疫力等多种作用，近年来其抑制肿瘤的作用逐步成为研究热点，但其抗肿瘤的机制尚未揭示。本文以人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞为研究材料，运用MTT、PI染色、AnnexinV-FITC/PI

5、染色、流式细胞术、RT-PCR、Westernblot等方法研究CuB对SH-SY5Y细胞增殖的影响，为CuB预防和治疗神经母细胞瘤提供理论基础。主要研究结果如下：（1）CuB能有效抑制人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞增殖。MTT检测结果表明，随着时间和浓度的增加，CuB对SH-SY5Y细胞的抑制作用增强；CuB作用24h的半抑制浓度为8μM。（2）CuB对SH-SY5Y细胞G2/M期进行阻滞。通过不同浓度梯度的CuB处理神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞24h后，运用流式细胞仪检测细胞的周期情况，随着药物浓度的增加表现出明显的G2/M期阻滞

6、；此外，不同浓度的CuB处理SH-SY5Y细胞24h后，ROS明显升高。（3）RT-PCR结果显示CuB呈时间和剂量依赖性抑制G2/M期关键基因CyclinB1,CDK1和抗基凋亡因Bcl-2转录水平的表达，活化促凋亡基因Bax转录水平的表达；Westernblot结果表明CuB抑制周期关键蛋白CyclinB1,CDK1和抗凋亡蛋白Bcl-2的表达，活化促凋亡蛋白Bax的表达，亦呈时间和剂量依赖性；RT-PCR和Westernblot均证明CuB有促进SH-SY5Y细胞凋亡的效果。本实验结果表明，CuB有着显著的抗肿瘤效果，其抑制作用是通

7、过细胞周期阻滞和诱导凋亡引起的，从而为抗小儿神经母细胞瘤药物的研发提供了一种新的思路。关键词：葫芦素B；人神经母细胞瘤；细胞周期；RT-PCR；WesternblotI万方数据华中科技大学硕士学位论文AbstractHumanNeuroblastoma(NB)isanembryonalmalignanttumor,oneofthemostcommonextracranialsolidtumorsinchildren.Thereishighmorbidityandmortalityofthetumorininfantsandyoungchi

8、ldren,withpoorprognosis.Sofar,thereisnoeffectivewaytoimprovethissituation.CucurbitacinB(CuB)isak