神经外科鲍曼不动杆菌耐药性变迁及耐药机制研究

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1、上海交通大学硕士研究生学位论文神经外科鲍曼不动杆菌耐药性变迁及耐药机制研究学生姓名陈艺升指导教师应春妹学科专业临床检验诊断学答辩日期2015年4月神经外科鲍曼不动杆菌耐药性变迁及耐药机制研究InvestigationondrugresistenceandresistantmechanismsofAcinetobacterbaumanniiisolatedfrompatientsinneurosurgery作者姓名：陈艺升学号：1127219258指导教师：应春妹学科专业：临床检验诊断学资助基金项目：国家自然科学基金面上项目（81371874）研究方向：细菌耐药性

2、监测和耐药机制研究申请学位级别：硕士培养单位：上海交通大学医学院附属仁济医院答辩日期：2015年4月上海交通大学2012硕士研究生毕业论文II上海交通大学2012硕士研究生毕业论文III上海交通大学2012硕士研究生毕业论文神经外科鲍曼不动杆菌耐药性变迁及耐药机制研究摘要目的：了解近年来上海仁济医院神经外科病房分离鲍曼不动杆菌的耐药性变迁；对菌株进行分子流行病学调查，分析菌株基因同源性，了解本院神经外科分离鲍曼不动杆菌的主要流行克隆，为临床治疗和控制院内感染提供依据；检测β-内酰胺酶基因、主动外排系统结构基因和调控基因在菌株当中的分布，并对主要外排系统结构基因进

3、行基因表达量分析，探讨鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类的耐药机制。通过检测blaoxa-23耐药基因所在的转座子结构，并对它的上载质粒进行测序分析，深入了解质粒结构特征，更好得解释blaoxa-23耐药基因的播散机制，对正确控制传播具有重要的意义。方法：1、收集2011年7月至2013年6月上海仁济医院神经外科病房分离鲍曼不动杆菌共87株。琼脂稀释法检测菌株对临床12种抗菌药物的最低抑菌浓度（minimuminhibitoryconcentration,MIC），分析三年来本院神经外科分离鲍曼不动杆菌的药物敏感性和耐药性变迁。2、采用多位点序列分型（multi-locu

4、ssequencetyping,MLST）技术鉴定87株鲍曼不动杆菌的基因型别，分析菌株流行特征。3、聚合酶链反应（PolymeraseChainReaction,PCR）检测β-内酰胺酶基因与RND家族3个主要外排系统AdeABC、AdeIJK及AdeFGH的结构基因与调控基因携带情况，比较其在亚胺培南耐药组（imipenem-resistantAcinetobacterbaumannii，IRAB）和亚胺培南敏感组（imipenem-sensitiveAcinetobacterbaumannii，ISAB）中的分布差异，用实时荧光定量聚合酶链反应（Realt

5、ime-PCR，RT-PCR）检测主要外排泵结构基因adeB、adeJ和adeG的基因表达水平。4、选取blaoxa-23耐药基因检测阳性的耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌（carbapenems-resistantAcinetobacterbaumannii，CRAB），PCR法检测blaoxa-23基因所在的转座子类型，通过质粒抽提、Southern杂交等方法确定blaoxa-23耐药基因所定位的质粒，并对质粒进行测序分析。IV上海交通大学2012硕士研究生毕业论文结果：1、上海仁济医院神经外科病房连续三年分离鲍曼不动杆菌对头孢菌素类、氟喹诺酮类、氨基糖苷类和碳青霉

6、烯类等抗菌药物耐药性高，耐药率呈逐年上升趋势。87株鲍曼不动杆菌对米诺环素的耐药率最低，为33.2%；对亚胺培南和美罗培南的耐药率分别为74.7%和80.5%；其余抗菌药物的耐药率均在70%以上；对磺胺甲噁唑/甲氧苄啶全耐药。另外，CRAB菌株往往同时对头孢菌素类、氨基糖苷类、氟喹诺酮类等抗菌药物耐药。2、MLST分型结果显示87株鲍曼不动杆菌可以分为6种ST型，分别是ST208型（45株）、ST191型（15株）、ST540型（8株）、ST195型（2株）、ST381型（2株）和ST368型（1株）。ST208型是主要的流行型别。除ST381型外，其余5种型别

7、均属于CC92克隆群，具有基因同源性，提示神经外科存在鲍曼不动杆菌克隆流行。3、本研究检测了OXA-23、OXA-24、OXA-51、OXA-58、AmpC、IMP-1及VIM-1/2型等耐药基因，发现所有菌株均携带OXA-51基因，未检测到OXA-24、OXA-58、VIM-1和VIM-2型基因。β-内酰胺酶基因AmpC、OXA-23和IMP-1的检出率分别为93.1%、93.1%和83.9%。AdeABC外排泵系统的adeB、adeS和adeR基因检出率分别为96.6%、96.6%和83.9%。AdeIJK及AdeFGH外排泵系统的adeJ、adeL、ade

8、F、adeG和adeH基