橄榄组织培养研究进展

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1、橄榄组织培养研究进展摘要：从外植体种类及取得的成果、愈伤组织的培养、研究的瓶颈等方面综述了橄榄组织培养研究进展，并对今后工作进行了展望。关键词：橄榄；组织培养；研究进展；外植体；愈伤组织；研究瓶颈前言:橄榄，又名青果，因果实尚呈青绿色时即可供鲜食而得名。橄榄富含钙质和维生素C。果肉内含蛋白质、碳水化合物、脂肪、维生素C以及钙、磷、铁等矿物质，其中维生素C的含量是苹果的10倍，梨、桃的5倍。其含钙量也很高，且易被人体吸收。橄榄为橄榄科橄榄属植物，原产中国南部地区，在我国已有2000多年栽培历史,广泛分布在广东、广西、云南、海南、福建、台湾、湖

2、南等地。[1]橄榄是我国南方特色水果和出口创汇的特产水果之一,有众多名贵栽培品种。由于常规繁育方法不利于保持母本优良品质,导致橄榄品质下降,优良品种未得到开发和推广[2]o采用组培技术繁育橄榄可避免许多不利因素,比常规育种更有效、更快速地改造品种缺点,短周期内繁殖出大量性状整齐的优良无性系苗;同时还能保持其母株优良性状，防止病虫害传播和重复感染。目前，关于橄榄组织培养技术的研究很少[3],为了促进橄榄组织培养技术的发展，本文主要探讨了组织培养技术在橄榄的研究现状和以及存在的问题。1外植体的选择以及取得的成果植物体上切取下来进行培养的那部分组

3、织或器官叫做外植体。橄榄组培中所用的外植体有以下几种：嫩梢的叶片、叶柄、完整茎段、剥去外表皮茎段、橄榄成熟胚。外植体的选择是建立橄榄愈伤组织再生体系的关键。理论上植物体的各个部位，如茎尖、茎段、皮层及维管组织、表皮、块茎、花瓣、根、叶等都可作为外植体诱导出良好的胚性愈伤组织,但各种植物细胞全能性表达存在很大差别［3］o在同样培养条件下，不同组织或器官来源的外植体再生能力有很大差别，可能由于它们对植物生长调节剂等外源信号的感应程度不同。其中用成熟胚作为外植体已取得比较好的成果。其中蔡汉权［4］等采用离体的橄榄成熟胚在无菌条件下培养成橄榄胚苗，

4、分别以上、下胚轴及胚根为材料，探讨橄榄愈伤组织的诱导方法。筛选出的MS+KT0・5mg•L—1+6—BAO・5mg•L-1+2,4-DO.5mg-L-1培养基组合为诱导愈伤组织的有效培养基。这为橄榄的细胞培养及胚状体诱导奠定了基础。蔡汉权等［5］以橄榄常见品种惠圆的成熟胚为外植体，研究橄榄成熟胚培养的方法、培养反应和影响因素。建立了橄榄成熟胚离体无菌培养的有效方法；获得了橄榄无菌胚苗、愈伤组织、气生根和胚状体等4种培养物，为进一步的橄榄离体快速繁殖、细胞悬浮培养、原生质体培养、遗传转化以及离体种质保存等生物技术研究奠定基础。蔡汉权等［6］用

5、橄榄成熟胚作为外植体，诱导胚长成无菌苗，在成熟芽苗上诱导多分枝侧芽及生根，筛选出MS+6DBA0.5+KT1+NAA0.5为诱导多分枝侧芽的适合培养基，取得92%的侧芽诱导率。2•愈伤组织的培养组织培养中，愈伤组织的成功获得是关键。目前，橄榄愈伤组织的研究已取得一些突破性的成果。其中，赖钟雄［7］及沈庆斌［8］的研究认为，AgN03对愈伤组织的生长及原胚分化有抑制作用。蔡汉权［4］研究表明，橄榄成熟胚的下胚轴是诱导愈伤组织的合适材料，同时生长调节剂2,4-D对橄榄下胚轴诱导愈伤组织的影响最大,2,4-D是橄榄下胚轴诱导愈伤组织的关键因素。3

6、.研究的瓶颈橄榄的多酚氧化酶活性很高，在离体无菌培养过程中极易被氧化引起褐变死亡，这是橄榄等生物碱含量较高、培养过程容易产生褐变的植物共同存在的瓶颈问题［刃，许多研究者也重点在研究解决这一问题。其中，蔡汉权［10］的研究结果表明使用固-液培养基，有利于控制多酚氧化酶的活性，减少褐变的产生。固-液培养基在利用活性炭吸附代谢产物、减少光氧化的同时，借助Vc溶液稀释代谢产物并将其带离材料基部，减少了代谢产物对基部的毒害作用，从而减少了褐变的产生。固-液培养基制作方法是：先按传统方法配制固体培养基（含活性炭0.2g/L,各激素含量依诱导配方而异），

7、灭菌，冷却凝固。配制10%的Vc溶液,灭菌后存放于冰箱备用。在超净工作台上将已经冷却的Vc溶液滴加在固体培养基的表面，形成1-2mm的液体层，即为固-液培养基。郑玉忠［3］等的研究结果显示抗氧化剂维生素C可改变外植体周围氧化还原电势，从而抑制酚类氧化，减轻褐变;剥去表皮茎段的褐变较轻，可能是外植体的外部细胞在接种中更易受害，细胞内褐化物质分泌多，而剥去表皮后减少了褐化物质对外植体的影响。4•展望橄榄的组织培养是解决橄榄种苗来源、扩大种植面积的重要的途径。虽然有用成熟胚作为外植体成功获得了橄榄的幼苗的报道，但褐变严重，多数研究尚处于起步阶段，

8、仍处于试验阶段而没有进行工业化生产。应进一步扩大外植体的选择范围，比较不同外植体诱导的差异，找岀适宜的培养基种类、最佳的激素种类与配比以及适宜无机盐浓度、光照强度和温度是建立橄榄