膀胱尿路上皮癌ILK基因表达及沉默ILK基因的相关研究

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1、中图分类号—垦生UDC61O博士学位论文学校代码!Q§三三密级公珏膀胱尿路上皮癌ILK基因表达及沉默ILK基因的相关研究ResearchofGeneExpressionandSilenceofIntegrin—·linkedKinaseinBladderUrothelialCellJ1●Larclnoina作者姓名：学科专业：研究方向：学院(系、所)：指导教师：魏寅生临床医学外科学湘雅二医院杨金瑞教授论文答辩日期丝!查：兰：习答辩委员会主席中南大学二。一三年五月原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特

2、别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：趣童垒日期：当年上月型日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信

3、息服务。日期：旦阻年三月丑日膀胱尿路上皮癌ILK基因表达及沉默ILK基因的相关研究摘要膀胱癌(bladdercancer,BC)是发病率第六位的世界性恶性肿瘤，也是我国最常见的泌尿系统恶性肿瘤，其中尿路上皮癌(urothelialcellcarcinoma，UCC)占膀胱癌的90％左右，约50％．70％的患者会出现术后复发。除此之外，约40％的患者其肿瘤的恶性程度会增加，而最终将有20．30％的患者将死于膀胱癌。目前BUCC的诊断和监测主要依靠膀胱镜、尿脱落细胞学(urinecytology)等检查手段，膀胱镜检查属于有创性检查，其检测效果尚可，但会给患者造成生理创伤

4、和精神痛苦，造成患者的恐惧与回避；而尿脱落细胞学检测耗时长，阳性率不高，不适合作为一个早期检测膀胱癌的筛查手段；在治疗方面，无论是手术治疗还是辅助化疗，均很难达到彻底根治效果，寻找治疗BUCC的新方法是时下急需解决的难题。因此，研究BUCC发生发展的分子生物学机制，从分子水平上探明膀胱癌的发生、增殖、侵袭及迁移机制，发现BUCC的早期诊断、预后估计的无创性敏感指标，拟定分子靶向治疗的理论基础和可能方案，从而提高膀胱癌的临床诊疗水平，是泌尿外科临床和科研上急需解决的热点和重要课题。整合素连接激酶(ILK)作为一个重要的信号整合器在人类癌症发展过程的上皮间质化(EMT)过

5、程中起着重要的作用，但其机制尚不完全清楚。研究发现，ILK在细胞内有蛋A激酶B(proteinkinaseB，PKB／AKT，PKB可以通过直接磷酸化下游蛋白底物发挥抗凋亡作用)和糖原合成酶激酶一313(glycogensynthasekinase-3p，GSK一313)两个催化位点，ILK能通过磷酸化PKB和GSK．3p参与到相应的信号通路。磷酸化的PKB生物活性降低，使得细胞凋亡受抑制，使肿瘤细胞存活时间延长；GSK．3p的磷酸化导致细胞周期蛋白D1(cyclinD1)等基因的表达上调并影响细胞周期，促进细胞增殖；ILK的过量表达还能够通过磷酸化PKB而诱导转录因

6、子Snail和ZEBl的表达，从而抑制E．钙粘蛋白(E．cadherin)的表达，其在肿瘤细胞内的表达受抑可提高肿瘤的侵袭和转移率，促进肿瘤的侵袭和迁移；与此同时，ILK也能刺激MMP．9的表达，并通过磷酸化PKB诱导MMP．2的表达，促进细胞的侵袭和迁移。ILK可调配细胞外基质及生长因子的信号传导，调控细胞的生长、分化、迁移。国外学者研究发现膀胱癌细胞中ILK表达显著升高，并能通过对E．cadherin和MMP．9表达的调节提高膀胱癌的侵袭性，而MMP．2在此过程中无明显变化。国内学者王德林等和朱军等分别研究ILK与膀胱癌的关系，其结果显示ILK的表达分布与BUCC

7、病理分级有关，而与临床分期无关，且其通过影响E—cadherin、MMP．2和MMP．9促使肿瘤细胞侵袭迁移。结果与国外学者研究不完全一致。总而言之，目前关于ILK对膀胱癌发生发展影响的研究并不充分，其中部分机制仍未研究透彻，而对于MMP一2在膀胱癌细胞迁移过程中的作用结论不统一。本研究分为三个部分，在临床标本与体外细胞培养两个水平研究BUCC中ILK基因的表达及其意义，揭示ILK与BUCC发生发展的相关性：第一部分采用Western．blot，RT-PCR的方法分别检测膀胱尿路上皮癌组织和癌旁正常膀胱组织中ILK和ILKmRNA的含量，探究ILK基