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1、PoultryScience综述卵黄抗体的提纯及应用12322朱晓东,陈大健,郭永刚,郝智慧,周颖斌(1.江苏京海禽业集团有限公司,江苏南通226103;2.青岛六和药业有限公司;3.郑州牧业工程高等专科学校)摘要:卵黄抗体因具有价格便宜、制备方便等其它抗体无可比拟的优点,而成为当今生物科学领域研究的一个热点。卵黄抗体已被越来越广泛地应用于许多疾病,尤其是家禽传染病的防治,并获得了显著的效果。此外,它还被应用于免疫学技术和疾病的监测等方面,显示出多方面的应用价值。本文对其提纯方法及应用作一综述。关键词:卵黄抗体;提纯;应用中
2、图分类号:S852.31文献标识码:A文章编号:1673-1085(2007)03-0041-03鸡卵黄抗体(IgY)是极具开发潜力的抗体资源。亲缘关系较远,有利于疾病控制,用鸡生产人用的自从1983年,Klemperer首次报道鸡蛋中存在抗体免疫球蛋白,不会将导致人类疾病的病原微生物引以来,人们对卵黄抗体(IgY)的研究越来越多,认识入到病人的体内,可以解决治疗上的后顾之忧。越来越深入,应用亦日益广泛。母鸡受免疫刺激后1提取与纯化产生免疫反应,在输卵管内卵黄成熟期,血液中近二十几年来,已建立了许多较为高效而经济IgG可被选
3、择性地转移至卵黄中,并且成为卵黄中的方法,如盐析、乙醇和聚乙二醇沉淀法、疏水层析[1]唯一的免疫球蛋白类,这种由血液转移入卵黄液法、辛酸沉淀法(CA法)等。产量约为每毫升卵黄提的IgG类抗体即为卵黄抗体(YolkImmunoglobu-取IgY5～715mg,纯度87%～89%。此外,其它应用lin,IgY)。它是一种7S免疫球蛋白,分子量约为于多克隆抗血清制备的方法也皆可用于IgY的制180kDa,含两个亚单位,即67～70kDa的重链和22～备。值得一提的是,要纯化卵黄抗体,单采用一种方[2]30kDa的轻链。卵黄中Ig
4、G的含量等于甚至要高法往往是不够的,常需将多种方法综合应用。于母鸡血清中的IgG。卵黄作为特异性抗体的来源1.1方法有许多优点,如:母鸡易于饲养,费用不高,收集鸡1.1.1盐析法盐析破坏蛋白质的水化层,使疏水蛋方便,无须抽取动物血液,无损伤,符合现代动物基团暴露,蛋白质的可溶性随着盐浓度的增加呈对保护规则;产生有效的抗体反应所需抗原量小;在数下降,蛋白质很容易沉淀析出。采用盐析技术提取国内,鸡是率先实现SPF化和产业化的实验动物,和浓缩IgY是一个简单温和的方法。虽然分离率不有利于规模化生产;禽类与以人为代表的哺乳动物高,但
5、适用于大量生产,而且价值便宜,特别适用于收稿日期:2007-02-20纯化流程的前期的最终的浓缩。!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!作用随着锌添加水平的上升而增强。对饲料转化比距;反之,体内某种微量元素过量时,相对应的元素而言,添加蛋氨酸锌50mg/kg时达到最佳;添加效的利用率会下降,可能更容易比较有机微量元素与果在饲养前、中期优于后期,这可能是由于肉鸡处无机盐之间的差距。在不同生长阶段,机体对锌的需要量和调节能力存综上所述,微量元素氨基酸螯合物在肉鸡养殖在差异。业上具有
6、明显的效果,是一种具有广阔发展前景的鸡体内某种微量元素的缺乏、适当和过量时,营养性饲料添加剂。应该加强研制开发工作,改进对相应元素的利用效率不同。体内某种微量元素缺生产工艺,降低生产成本,提供质优价廉产品,探讨乏时,相对应的微量元素的利用率会升高,从而缩理想添加水平和影响因素,加强推广应用工作,促小了有机微量元素与相应无机微量元素之间的差进养鸡业的健康迅速发展。□41综述家禽科学2007.31.1.2乙醇和聚乙二醇沉淀法乙醇与水有很强间的结合,使用这类洗脱方法要特别注意防止蛋白的结合力。在蛋白质溶液中加入乙醇,可以破坏水质变
7、性,尽快中和或除去变型剂。总之,亲和层析可化层暴露疏水性氨基酸残基,引起蛋白质沉淀,特获得生物活性特异的高纯度IgY,甚至可从复杂的[10]别在等电点条件下,沉淀更快速完全,是实验室制混合物中一步提纯目的IgY。[3]备IgY的常用方法。聚乙二醇(PEG)是非离子型1.2各种综合提取方法的比较卵黄抗体的纯化水溶性聚合物,有很强的亲水性,即使浓度很高也实际是各种方法的综合应用。各种综合提取方法在不会引起蛋白质变性,沉淀蛋白质的时间比硫酸铵提取率、脂类残留、纯度、安全性、经济、是否适用于或乙醇都短,不影响离心处理,并有促进蛋白质
8、结工业化生产等方面都各具优缺点。PEG法、盐析法晶的作用,用PEG6000沉淀卵黄的抗体蛋白,14%产率低的原因是沉淀抗体和其它杂蛋白时,抗体损[4]的PEG可使IgY沉淀。此外,还有硫酸葡聚糖法失较多,而采用水溶法,使抗体尽可能多留在水相[5][6](DS法)、海藻酸钠法(SD法)及黄胶
