卵黄抗体在水产中的应用.doc

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1、卵黄抗体在水产上的使用状况卵黄抗体又称卵黄免疫球蛋白（IgY），一般以鸡作为供体，经一种或多种特定抗原免疫诱导后在卵黄中蓄积，机体所产生的特异性抗体，具有类似哺乳动物IgG的免疫活性，可有效防治特定疾病。近年来，在畜禽疾病的诊断与防治方面卵黄抗体的运用已非常广泛，可将其作为抗生素替代品或饲料添加剂等进行使用，在动物养殖业中具有广阔的应用前景。目前，用卵黄抗体防治水产动物疾病的研究报道较少，但因其具有疗效确切、使用安全、无毒副作用、制备工艺简单、生产成本低等优点，使得以其防治水产动物疾病逐渐受到重视。1.IgY的发展以及研究状况18

2、93年，著名德国医生莱比锡通过免疫蛋鸡的试验发现其所产鸡蛋的蛋黄中具有能中和免疫原的特异性蛋白质，即卵黄抗体IgY。自此，各国学者相继对其分子结构、理化性质、制备工艺、检测方法及应用等领域进行了广泛而深入的研究。20世纪80年代以来，归因于商品试剂的推广，IgY抗体开始进入商品应用。1996年，IgY抗体的生产和应用被定义为IgY技术。如今，它己是一个世界性的标准化技术。1996年，欧洲实验方法替换确认中心推荐使用IgY来代替哺乳动物IgG，以减少由于抗体采集而造成对动物的伤害。1999年，基于对动物权益的保护，IgY技术被瑞士联

3、邦政府兽医办公室接受为可行的替代办法。美国的FDA己将特异性卵黄免疫球蛋白视为替代抗生素的首要候选药物，日本政府投入巨资扶持“禽源抗体产业”。美国、韩国、台湾等发达国家和地区利用卵黄抗体成功研制了各种功能性食品、饲料添加剂和防制动物疫病的生物制品。目前，在人类医学、动物医学、动物科学和其他诸多生命科学领域，有关卵黄抗体产品的研发与应用呈逐年上升趋势，尤其是卵黄抗体代替抗生素在动物生产中的应用被广泛认可。2.IgY的理化性质IgY是一种7S免疫球蛋白，分子量约180kD，由两条重链(分子量67-70kDa)和两条轻链(分子量22-3

4、0kDa)组成，含氮量为14.8%。IgY的结构与哺乳动物的IgG相似，具有典型的免疫球蛋白的空间构象，也可与抗原结合。IgY的pH稳定性较好，在pH4.0-11.0时比较稳定，pH3.0-3.5时活性迅速下降，pH12.0时活性亦有所下降，在pH>12.0时迅速失活。此外，IgY也具有良好的耐热能力。在低于75℃条件下，具有良好的热稳定性，高于80℃大部分IgY将失去活性。IgY制剂在4℃存贮5年或在室温贮存6个月其活性仍无明显变化或下降，IgY对胃蛋白酶有较好的抵抗力，但对胰蛋白酶十分敏感。IgY具有耐巴氏消毒，而且耐反复冻融

5、的特性。1.IgY的分离纯化鸡卵黄提供了一个大量的、廉价的、易纯化的抗体来源。一只蛋鸡每年可产200-300枚蛋，从一枚鸡蛋中可获得100-200mgIgY。如何将大量的卵黄抗体提取出来，是决定IgY能否被广泛应用的一个重要前提。鸡卵黄中含有水48.0%、蛋白质17.8%和脂肪30.5%，其中几乎所有脂肪都与蛋白质相结合而以脂蛋白的形式存在。卵黄中不与脂肪结合的蛋白为水溶性蛋白，IgY则为水溶性蛋白，它以Y活性蛋白的形式与另外两种水溶性蛋白-α活性蛋白(鸡血清蛋白)、β活性蛋白以及其他各种脂蛋白一起存在于卵黄中。从卵黄中获得IgY

6、的过程包括分离、提取、纯化。IgY分离纯化的原则是简便、高效、经济。目前常用的分离方法主要有：有机物沉淀法、有机溶剂抽提法、水稀释法、超临界气体提取法、去污剂分离法等（表1）。为了将IgY提取出来，主要通过超滤法或沉淀法来完成。沉淀法所用的沉淀剂可以是无机物、有机物或有机溶剂，也可以采用多种方法联合沉淀，或沉淀法和超滤法相结合提取。其中水稀释法最为简单和经济，利用卵黄抗体可溶于水的特性，除去不溶的脂蛋白。Akita等使用此法，每毫升卵黄中获得9.8mg的抗体，回收率达到了91%。有机物沉淀法使用的有机溶剂主要有PEG6000、硫酸

7、葡聚糖等，有机溶剂如氯仿，生物制剂如角叉藻胶等也都能够较好地去除脂蛋白，获得卵黄抗体。为满足不同的使用目的，多数情况下需对提取得到的卵黄抗体进一步纯化，纯化时常用的方法有：凝胶层析、离子交换层析以及亲和层析。目前使用的提取、纯化方法各有优缺点：沉淀法简单、经济，但其提取的物质纯度低；亲和层析能得到高纯度的特异性卵黄抗体，但因产率低、费用高而不能得到大规模应用，仅适用于科研。从工艺路线上看，水稀释法具有工艺简便、生产成本较低、采用适当的方法进行纯化，产品纯度和回收率高等优点，比较适合大规模工业化生产。1.IgY的稳定性的保护对于幼龄

8、动物，消化系统尚未发育完全，IgY可抵抗其消化酶的消化，故可将一定量的针对某些疾病的IgY添加到饲料或饮用水中，使幼龄动物获得被动免疫保护。对于成年动物，为了减少添加的IgY的损失，可采用一定的措施，如IgY的优化和设计。Shimizu等(1992