液相色谱法测定茶叶中黄曲霉毒素B

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1、陈玉森学号：03088009液相色谱法测定茶叶中黄曲霉毒素B11、黄曲霉毒素，aflatoxin,简写AFT。一、概述为黄曲霉产毒菌株的代谢产物，属超剧毒物质。尤以AFTB1最为重要，毒性最强。2、理化性质（1）溶解性：难溶于水和乙醚、石油醚、已烷等非极性或弱极性溶剂中。易溶于甲醇、氯仿、乙腈等极性溶剂中，溶于苯。（2）定性：对光、热、酸稳定；对碱和氧化剂不稳定。光：AFTB1和AFTG1溶液，日光照1d，分解仅40%。得低浓度纯品易为紫外光破坏。故标准品宜用黑纸包裹储存。热：开始分解温度B1，268～

2、269℃酸：弱酸和中性介质中稳定；强酸和碱性条件下分解。pH＜?时分解；pH=9～10时迅速分解成几乎无毒的盐（内酯键打开）：氧化剂：对氧化剂也不稳定，氧化剂浓度越大，分解速度越快：CNaClO(g/L)破坏AFT所需的时间54.5(g/L)立即50(g/L)5s40(g/L)1min30(g/L)2min20(g/L)3min10(g/L)5min5(g/L)30min故实践上常可用漂白粉、氯、高锰酸钾、过氧化氢等消毒。3、毒性（1）为已知的100多种霉菌毒素中毒性最大的，属强致癌性物质[有报道说，其

3、毒性比氰化钾更大，约大100倍，比B（a）P大4000倍]，可对动物造成急性中毒，也可引起慢性中毒和致癌、致畸、致突变。它在WHO确定的重点研究毒物中被列为首位。1）各种AFT的毒性大小并不相同：顺序B1G1B2M1G2M2B2aLD0.360.781.73.23.512240(50mg/kg)注：对鸭雏，LD50小于50mg/kg即为剧毒物美国研究结论，1μg/kgAFTB1可使大白鼠致癌；我国研究，20μg/kg可使大白鼠致癌。（2）与人致癌的关系黄曲霉毒素高污染地区，其肝癌发病率明显较高。如江苏的

4、启东，福建的铜安，广东的汕头，广西的抹援，为我国4个肝癌高发病地区。（2）污染调查很广泛，各种粮食中均可检出，核桃、乳及其制品、干辣椒中也有检出。但以花生、玉米、棉籽及其制品污染最为严重，稻谷、高粱其次，“三麦”甚微。（1）污染特点玉米：胚部污染；花生、棉籽：整粒污染但仅限于少数颗粒；小麦：皮层污染。（2）污染调查1976～1978年，粮食部组织，调查了18个粮种，取样19122个，检出7233个，检出率37.7%,其中超标率占49.2%。主要粮种情况（μg/kg）：玉米，平均400，最高1000～12

5、00；(所以不要吃玉米)花生，平均200～500，最高50000；(所以不要吃花生)花生油，平均400，最高8000；(所以不要吃花生油)稻谷（洞庭湖）平均50～100，最高330。(所以不要吃稻谷)总体分布，广西、福建、江苏污染最严重，山东以北诸省污染少。5、限制标准（≤μg/kg）（1）GB花生、玉米、花生油及其制品，20；大米及其它食用油，10；其它粮食、豆类、发酵食品，5；婴儿代乳品，不得检出。（2）国外标准（μg/kg）FAO/WHO，15；美国，25；加拿大，15；日本，10；印度，30；以

6、色列、瑞典，不得检出。1.适用范围本方法适用于出口茶叶中黄曲霉毒素B1含量的检验。2.原理概要样品用三氯甲烷提取，提取液经硅胶柱净化，净化后的提取液用三氟乙酸衍生，用配有荧光检测器的液相色谱仪测定，外标法定量。3.主要试剂和仪器3.1.主要试剂三氯甲烷；正己烷；苯；甲醇：紫外光谱级；乙腈：紫外光谱级；三氟乙酸；乙腈-水溶液(1＋1)；三氯甲烷-甲醇溶液(95＋5)；苯-乙腈溶液(98＋2)；黄曲霉毒素B1标准品：纯度≥99%；黄曲霉毒素B1标准溶液：准确称取适量的黄曲霉毒素B1标准品，以苯-乙腈溶液于棕

7、色容量瓶中，配成浓度为10μg/mL标准贮备液。根据需要，再配成适当浓度的标准工作溶液。3.2.仪器液相色谱仪，配有荧光检测器；硅胶小柱：WatersSep-pakSilica前处理小柱或相当的硅胶前处理小柱；振荡器；旋转蒸发器，配有100mL具尾管的圆底烧瓶；微量注射器；离心管：5mL具塞磨口；粉碎机；滤膜：有机系用，0.45μm；微孔滤膜过滤器：有机系用，0.5μm。4.试样的抽取与制备4.1.检验批以不超过2000件为一检验批。同一检验批的商品应具有相同的特征，如包装、标记、产地、规格、等级等。4

8、.3.抽样方法从整批产品堆垛的上下不同部位随机抽取2.2规定的件数，逐件开启。分别倒出全部茶叶于塑料布上，用取样铲从每件中各取出有代表性的样品约500g。将所取样品充分混匀，用四分法或分样器逐步缩分出500g，装入洁净密封的样品筒内，加封后，标明标记，及时送实验室。4.2.抽样数量批量，件最低抽样数，件1～516～50251～50011501～1000161001～1500191501～2000204.4.试样制备将所取回样品全部磨碎，通过