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1、豆豉中黄曲霉毒素B1测定方法研究刘宏程1*作者简介：刘宏程（1975~），男，硕士，主要从事食品安全研究。通信地址：昆明学府路农业部农产品质检中心，云南省农科院。Email:liuorg@163.com.云南省农科院院立课题资助,邹艳红1,张玉荣2，黎其万1,黄思司1，杨东顺1（1农业部农产品质量监督检验测试中心（昆明），云南省农业科学院，昆明,650223;2玉溪市农业科学院，玉溪，653100）摘要用间接竞争性ELISA法测定豆豉中黄曲霉毒素B1(AFB1)，结果为阳性，用荧光检测器测定的HPLC方法验证，结果为假阳性。ELISA法测定AFB1步骤简便、快速、操作安全，但对豆
2、豉样品容易产生假阳性，需要通过HPLC方法确认。建议豆豉样品不宜采用ELISA测定黄曲霉毒素B1。关键词黄曲霉毒素B1酶联免疫吸附法高效液相色谱豆豉DeterminationOfAflatoxinB1InLobsterSauceWasResearchedLiuHongcheng1*,ZhouYanhong1,ZhangYurong2,LiQiwan1,HuangSisi1,YangDongshun1(1Supervision&TestingCenterforFarmProductQuality,ministryofagriculture,(Kunming),Yunnanacade
3、myofagriculturescience,Kunming650223;2Yuxiacademyofagriculturescience,Yuxi,653100,China)Abstract:AflatoxinB1inLobsterSauceisdeterminedbyenzyme-linkedimmunosorbentassay(ELISA),theresultistrue;ItthatisvalidatedbyHPLCwithFluorescentisfalse.DeterminationofAFB1issimple,rapid,safebyELISA,butitsresu
4、ltisfalseinlobstersauce,whichisvalidatedbyHPLC.ItisnotrecommendedthatthemethodofdeterminationAFB1inlobstersaucebyELISA.Keyword:AFB1,ELISA,HPLC,LobsterSauce黄曲霉毒素(Aflatoxin，AF)是真菌毒素中毒性最大的一种，是世界上公认的最强化学致癌物质，危害性在于对人及动物肝脏组织有破坏作用,严重时,可导致肝癌甚至死亡.，1993年被WHO癌症研究机构划定为Ⅰ类致癌物。在天然污染的食品中存在的黄曲霉毒素以B1(AFB1，结构如图
5、1)污染最多见，其毒性和致癌性也最强。要严格控制食品中黄曲霉毒素的含量，必须要有快速、灵敏、准确、有效的分析测定方法作保证。图1黄曲霉毒素B1分子结构式（Fig1.structureofaflatoxinB1AFB1）目前检测AFB1的方法主要有酶联免疫吸附法,薄层色谱和高效液相色谱法。酶联免疫吸附法[1-3]是目前测定黄曲霉毒素B1的快速方法，灵敏度高、检验速度快、操作安全，成本低，由于该方法是生物化学法，具有对酸对盐敏感的特点，易出现假阳性结果,需要结合其他分析方法进行确认如同位素稀释质谱[4]、薄层色谱[5]、HPLC/MS[6]和免疫亲和净化法[7]等。高效液相色谱法[8
6、，9]测定黄曲霉毒素具有准确度高、精密度好的特点，主要用于测定粮谷[10-12]，玉米[13]、花生[14]、中药[15]中黄曲霉毒素B1。在进行无公害食品-豆豉的认证过程中，按国家标准[16]利用酶联免疫方法对豆豉样品中AFB1残留的测定，结果为阳性，通过选择最佳色谱条件，在HPLC上把干扰物质和AFB1完全分离，可以确认豆豉中AFB1为假阳性，对于其他豆豉样品也有类似情况存在，建议豆制品不宜采用ELISA方法进行测定，有条件实验室宜采用HPLC方法直接进行测定。1.实验部分1.1仪器及试剂Model680酶标仪（Bio-Rad公司），酶标微孔板（96孔），恒温水浴锅，恒温培养
7、箱，微量加样器及配套吸头，Alliance2695高效液相色谱仪(Waters公司)，配置四元泵溶剂淋洗系统，自动进样系统，2475荧光检测器，Sartorius纯水器(Germany公司)。试剂：三氯甲烷（分析纯），甲醇（分析纯），乙酸（优级纯），甲醇和乙腈（Fisher,HPLC级）。黄曲霉毒素B1试剂盒（北京百林康源生物有限公司）包含：PBS-T洗液，抗体，酶标二抗，阴性对照液，底物，底物液A，底物液B，终止液。1.2样品溶液制备及测定准确称取20g粉碎样品于250mL具塞
