宠物食品中黄曲霉毒素B的测定精.doc

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1、宠物食品中黄曲霉毒素B的测定(精)————————————————————————————————作者：————————————————————————————————日期：宠物食品中黄曲霉毒素B1的测定1　主题内容与适用范围本标准规定了粮食、花生及其制品、薯类、豆类、发酵食品及酒类等各种食品中黄曲霉毒素B1的测定方法。本标准适用于粮食、花生及其制品、薯类、豆类、发酵食品及酒类等各种食品中黄曲霉毒素B1的测定。本标准分为两法。在第一法中，薄层板上黄曲霉毒素B1的最低检出量为0.0004µg，最低检出浓

2、度为5µg/kg。第二法对黄曲霉毒素B1的最低检出浓度为0.01µg/kg。第一篇　第一法2　原理样品中黄曲霉毒素B1经提取、浓缩、薄层分离后，在波长365nm紫外光下产生蓝紫色荧光，根据其在薄层上显示荧光的最低检出量来测定含量。3　试剂3.1　三氯甲烷。3.2　正己烷或石油醚(沸程30～60℃或60～90℃)。3.3　甲醇。3.4　苯。3.5　乙腈。3.6　无水乙醚或乙醚经无水硫酸钠脱水。3.7　丙酮。以上试剂在试验时先进行一次试剂空白试验，如不干扰测定即可使用，否则需逐一进行重蒸。3.8　硅胶G：

3、薄层色谱用。3.9　三氟乙酸。3.10　无水硫酸钠。3.11　氯化钠。3.12　苯-乙腈混合液：量取98mL苯，加2mL乙腈，混匀。3.13　甲醇水溶液：55∶45。3.14　黄曲霉毒素B1标准溶液。3.14.1　仪器校正：测定重铬酸钾溶液的摩尔消光系数，以求出使用仪器的校正因素。准确称取25mg经干燥的重铬酸钾(基准级)，用硫酸(0.5+1000)溶解后并准确稀释至200mL，相当于c(K2Cr2O7)=0.0004mol/L。再吸取25mL此稀释液于50mL容量瓶中，加硫酸(0.5+1000)稀释

4、至刻度，相当于0.0002mol/L溶液。再吸取25mL此稀释液于50mL容量瓶中，加硫酸(0.5+1000)稀释至刻度，相当于0.0001mol/L溶液。用1cm石英杯，在最大吸收峰的波长(接近350nm处)用硫酸(0.5+1000)作空白，测得以上三种不同浓度的摩尔溶液的吸光度，并按式(1)计算出以上三种浓度的摩尔消光系数的平均值。　　式中：E1——重铬酸钾溶液的摩尔消光系数；　　A——测得重铬酸钾溶液的吸光度；　　c——重铬酸钾溶液的摩尔浓度。　　再以此平均值与重铬酸钾的摩尔消光系数值3160比

5、较，即求出使用仪器的校正因素。　　式中：f——使用仪器的校正因素；　　E——测得的重铬酸钾摩尔消光系数平均值。　　若f大于0.95或小于1.05，则使用仪器的校正因素可略而不计。3.14.2　黄曲霉毒素B1标准溶液的制备：准确称取1～1.2mg黄曲霉毒素B1标准品，先加入2mL乙腈溶解后，再用苯稀释至100mL，避光，置于4℃冰箱保存。该标准溶液约为10µg/mL。用紫外分光光度计测此标准溶液的最大吸收峰的波长及该波长的吸光度值。3.14.2.1　计算　　式中：X1——黄曲霉毒素B1标准溶液的浓度，µ

6、g/mL；　　A——测得的吸光度值；　　f——使用仪器的校正因素；　　M——黄曲霉毒素B1的分子量312；　　E2——黄曲霉毒素B1在苯-乙腈混合液中的摩尔消光系数，19800。根据计算，用苯-乙腈混合液调到标准溶液浓度恰为10.0µg/mL，并用分光光度计核对其浓度。3.14.3　纯度的测定：取5µl10µg/mL黄曲霉毒素B1标准溶液，滴加于涂层厚度0.25mm的硅胶G薄层板上，用甲醇-三氯甲烷(4+96)与丙酮-三氯甲烷(8+92)展开剂展开，在紫外光灯下观察荧光的产生，必须符合以下条件：3.1

7、4.3.1　在展开后，只有单一的荧光点，无其他杂质荧光点。3.14.3.2　原点上没有任何残留的荧光物质。3.15　黄曲霉毒素B1标准使用液：准确吸取1mL标准溶液(10µg/mL)于10mL容量瓶中，加苯-乙腈混合液至刻度，混匀。此溶液每毫升相当于1.0µg黄曲霉毒素B1。吸取1.0mL此稀释液，置于5mL容量瓶中，加苯-乙腈混合液稀释至刻度，此溶液每毫升相当于0.2µg黄曲霉毒素B1。再吸取黄曲霉毒素B1标准溶液(0.2µg/mL)1.0mL置于5mL容量瓶中，加苯-乙腈混合液稀释至刻度。此溶液每

8、毫升相当于0.04µg黄曲霉毒素B1。3.16　次氯酸钠溶液(消毒用)：取100g漂白粉，加入500mL水，搅拌均匀。另将80g工业用碳酸钠(Na2CO3·10H2O)溶于500mL温水中，再将两液混合、搅拌，澄清后过滤。此滤液含次氯酸浓度约为25g/L。若用漂粉精制备，则碳酸钠的量可以加倍。所得溶液的浓度约为50g/L。污染的玻璃仪器用10g/L次氯酸钠溶液浸泡半天或用50g/L次氯酸钠溶液浸泡片刻后，即可达到去毒效果。4　仪器4.1　小型粉碎机。4.