浅谈葛根中葛根素的成份的分析

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1、浅谈葛根中葛根素的成份的分析摘要:目的建立不同品种葛根中葛根素及总黄酮的含量测定方法。方法采用RP-HPLC法，以甲醇■水(32:68)为流动相，检测波长为250nm测葛根素含量;紫外分光光度法测柴葛、粉葛屮总黄酮含量。结果葛根素峰分离度提高，峰形改善;葛根素0.204〜2.04昭范用内与峰面积线性关系良好(r=0.9999),回收率为98.7%(n=5),精密度RSD=0.86%o总黄酮浓度在4.08-16.32卩g/ml范围内与吸收度线性关系良好(=0.9998)。结论该法灵敏、准确、简便易行,重复性好,

2、可用于中药葛根药材及饮片的质量控制。关键词:葛根葛根索含量分析0引言葛根为豆科植物柴葛和甘葛藤的干燥根，前者习称柴葛，甘葛藤习称“粉葛”,始载于《神农木草经》，味廿、辛，性平，貝•有增加脑及冠状动脉血流虽:、降低血管阻力、收缩平滑肌、降血糖及解热等多种功效。民间用于治疗伤寒、温热头痛、烦热消渴等症，也是中医常用的祛风解毒药。现代研究表明，葛根含葛根异黄酮，主要为葛根索、人豆背、大豆廿元3种活性成分,其屮葛根素是木属的特征成分，也是主要成分,为了对葛根进行有效的质竝控制，木实验以葛根素为指标，以柴葛、粉葛药材为

3、对象,建立了高效液相色谱法测定其葛根索的含量方法，并采用紫外分光光度法对其屮的总黄酮进行了含量测定，为柴葛、粉葛的药材鉴定提供参考方法。1仪器与材料1」仪器美国Waters公司600-2487高效液相色谱仪,Millenium数据处理系统:Waters2487紫外检测器;岛津UV-2401PC型紫外分光光度计;岛津AY120型万分Z—电子分析天平;SB3200型超声清洗器。1.2材料葛根索对照品:屮国药品生物制品检定所;甲醇为色谱纯;水为重蒸係超纯水;其它试剂均为分析纯。柴葛产于安徽岳西，粉葛产于广西。2方法

4、与结果2.1HPLC法测定葛根中葛根素的含量2.1.1色谱条件色谱柱:ZorbaxXDB-C18(4.6mmx250mm,)m);流动相:甲醇•水(32:68);流速Iml/min;检测波长250ng柱温22°C;进样体积10卩1。理论板数按葛根索峰计算不低于5000o在该色谱条件下，样品屮的葛根素与其它峰均能达到基线分离，保留时间在14.3min左右。2.1.2对照品溶液的制备和密称取葛根素对照品5.1mg,甲醇定容于25ml量瓶。分别移取().5,1.(),2.(),2.5ml于5ml量瓶,水定容，与原液

5、共同作为HPLC用对照品溶液。2.1.3供试品溶液的制备热冋流提取法:精密称取柴葛、粉葛粉末(过50目筛)各O.lg,置具塞锥形瓶屮，精密加入30%乙醇50ml,称重。冋流提取30min,放冷，称重并以30%乙醇补足减失垂量，摇匀过滤，取续滤液为供试品，待测。索氏捉取法:称取柴葛、粉葛粉末各0.5g,精密称定,以甲醇为捉取剂提取4h,过滤，浓缩提取液并用甲醇定容于10ml量瓶。超声处理3()min,取上清液以水定容于10ml罐瓶,待测。2.1.4线性关系考察取对照品溶液，按照色谱条件进样10川,葛根素进样量X

6、®g)为横坐标,以峰面积Y为纵坐标绘制标准曲线，其回归方程＞J:Y=3.5076xl06X+3.2745xl04,r=0.9999o结果表明，葛根素进样量在0.204〜2.04昭范围内与峰面积线性关系良好，可川外标两点法计算含量。2.1.5精密度考察在色谱条件下,吸取同一对照品溶液10pl,连续进样5次，测得峰而积,RSD=0.8%,表明进样与峰面积积分的精密度良好。2.1.6重复性考察取同一批柴葛、粉葛样品5份，按外标法计算含量,RSD=2.8%,表明分析方法重复性良好。2」.7稳定性考察精密吸取对照品溶液

7、10pl,分别在0,l,2,4,8,12,24,48h吋进样，在色谱条件下测定峰面积，其RSD值为1.4%。表明葛根素在室内正常条件下48h内稳定，因此整个实验过程可以在常温不避光的条件下操作。2丄8凹收率考察和密称取已知葛根素含量的同一样品药材粉末5份,2()mg/份，精密称定后,每份加入浓度为().204mg/ml的对照品溶液2.5〜3.3ml,按“供试品溶液制备”项下操作,精密吸取10卩1,进样,计算回收率。2.1.9样品测定按“供试品溶液制备”项下操作，制备各样品溶液，精密吸取lOpl,进样,在所选色

8、谱条件下测定，外标两点法计算含量。2.2紫外分光光度法测定葛根屮总黄酮含量2.2.1线性关系考察精密称取葛根素对照品5.1mg,甲醇定容于25ml量瓶。移取0.2,0.4,0.5,0.6,0.8ml置于10ml量瓶，水定容,为紫外测总黄酮用对•照站溶液。以溶液浓度为横处标，吸收度为纵他标，得线性方程：Y=0.078X+0.0152,r=0.9998o表明总黄酮浓度在4.08〜16.32yg/ml范围