课题3　分解纤维素的微生物的分离 (2).ppt

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1、1分解纤维素的微生物的分离太原市小店区一中生物组任建军2学习目标：1.简述纤维素酶的种类及作用。2.学习从土壤中分离出分解纤维素的微生物的方法。3.讨论这类微生物的应用价值。3纤维素是地球上含量最丰富的多糖类物质，是天然有机高分子化合物：自然界中纤维素含量最高的天然产物是棉花，含量达92％～95％，亚麻达80％，此外木材、作物秸秆也富含纤维素。许多商品纤维素都是由天然纤维素制得：如水溶性的羧甲基纤维素钠（CMC---Na）；不溶于水的微晶纤维素等食品添加剂。①纤维素含量一、基础知识1、纤维素45纤维素：葡萄糖②基本单位③简式（C6H10O5)

2、n④应用纤维素可用于纺织工业，可造纸⑤思考：纤维素是地球上含量最丰富的多糖类物质，植物每年产生的纤维素超过70亿吨，但却不会在地球上大量的积累，为什么？40～60%能被土壤中的某些微生物分解利用，这是因为它们能够产生纤维素酶62、纤维素酶水解纤维素生成纤维二糖和葡萄糖的一类酶的总称①定义②组分纤维素酶不是单一酶，是复合酶，包括C1酶、CX酶、葡萄糖苷酶。C1酶：(外切酶)从糖链的末端开始切掉两个葡萄糖分子，产生纤维二糖。葡萄糖苷酶：将纤维二糖分解为葡萄糖CX酶：(内切酶)作用于糖链的内部使之断裂成糖链片段。7A、人能不能对纤维素消化吸收？为什

3、么？答：不能，因为人体不能合成纤维素酶。人以淀粉为主要的能量来源。③思考：B、食物中的纤维素有什么作用？答：食物中的膳食纤维可刺激胃肠蠕动和分泌消化液，有助于食物的消化和排泄。C、反刍动物能利用纤维素吗？为什么？答：能，在反刍动物的瘤胃中生活着大量可以分解纤维素的微生物，能产生大量的纤维素酶8方法：滤纸崩溃法3、纤维素酶活性的测定实验：910A、①②③④⑤B、②③⑤C、②③④⑤D、③⑤C下列生物能分解纤维素的是（）①人②兔③牛④蘑菇⑤纤维杆菌11二、纤维素分解菌的筛选2、筛选原理：1、筛选方法：刚果红染色法刚果红（CR）是一种染料，它可以与像

4、纤维素这样的多糖物质形成红色复合物，但并不和水解后的纤维二糖和葡萄糖发生这种反应12通过产生的透明圈来筛选纤维素分解菌加入刚果红红色复合物红色复合物无法形成出现以纤维素分解菌为中心的透明圈纤维素被分解纤维素3、筛选过程：13144、纤维素分解菌的选择培养基和鉴别培养基①纤维素分解菌的选择培养基15答：液体培养基，因培养基中无凝固剂，利用液体培养基培养以增加纤维素分解菌的浓度B、培养基具有选择作用的原因答：能够产生纤维素酶的微生物才能分解纤维素作为碳源和能源，并大量繁殖；不能分解纤维素的微生物由于缺乏碳源受到抑制而不能正常生长繁殖，因此培养基具

5、有选择作用A、物理性质上看选择培养基的类型及原因思考：16C、你能否设计一个对照实验，说明选择培养基的作用？答：用牛肉膏蛋白胨培养基与其对照D、为什么选择培养能够“浓缩”所需的微生物？答：在选择培养的条件下，可以使那些能够适应这种营养条件的微生物得到迅速的繁殖。而那些不适应这种营养条件的微生物的繁殖被抑制，因此可以起到浓缩的作用。17②纤维素分解菌的鉴别培养基18三、实验设计1、实验流程19①分布环境（1）土壤取样：富含纤维素的环境中2、操作步骤由于生物与环境的相互依存关系，在富含纤维素的环境中，纤维素分解菌的含量相对提高，因此从这种土样中获

6、得目的微生物的几率要高于普通环境。②原因20③实例：树林中多年落叶形成的腐殖土，多年积累的枯枝败叶等。④讨论:如果找不到合适的环境，可以将滤纸埋在土壤中，将滤纸埋在土壤中有什么作用？你认为滤纸应该埋在土壤中多深？答：将滤纸埋在土壤中能使纤维素分解菌相对集中，实际上是人工设置纤维素分解菌生存的适宜环境。一般应将滤纸埋于深约10cm左右的土壤中。21（2）选择培养①目的：增加纤维素分解菌的浓度，以确保能够从样品中分离所需要的微生物②操作：称取土样20g，在无菌条件下加入装有30mL培养基的摇瓶中。将摇瓶置于摇床上，在30℃下振荡培养1～2d，至培

7、养基变混浊。吸取一定的培养液（约5mL），转移至另一瓶新鲜的选择培养基中，以同样的方法培养到培养液变浑浊。22（3）梯度稀释：吸取上清液1mL富集后的培养液，注入盛有9mL的无菌水的无菌大试管中，充分混匀；然后再用一只1mL无菌吸管从此试管中吸取1mL注入另一盛有9mL无菌水的试管中，依次等比稀释至106稀释度。（4）涂布培养将鉴别培养基平板分别标号，分别将稀释度为104～106的菌悬液各取0.1mL，对号滴加到鉴别培养基平板，并用涂布器均匀涂布。将培养基平板于300C倒置培养,至菌落长出。每个稀释度下需涂布3个平板231、刚果红染色法:（5

8、）筛选菌株：常用的刚果红染色法有两种，一种是先培养微生物，再加入刚果红进行染色反应，另一种是在倒平板时就加入刚果红方法一：在长出菌落的培养基上，覆盖质量浓度为1mg