固定化醇脱氢酶的制备及性质.pdf

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1、第26卷第6期化学研究与应用Vo1．26，No．62014年6月ChemicalResearchandApplicationJun．，2014文章编号：1004-1656(2014)06-0864-04固定化醇脱氢酶的制备及性质宁静，鄂鹏飞，柳畅先(中南民族大学化学与材料科学学院，分析化学国家民委重点实验室，湖北武汉430074)摘要：以壳聚糖为载体，通过交联结合使醇脱氢酶(ADH)得以固定化。固定化的最适条件为：交联剂戊二醛浓度0．6％，pH值6．8，酶的偶联时间2．5h。对游离酶和固定化酶的动力学性质研究表明，酶促反应的最适pH分别为

2、8．2和8．4，最适温度为34~C和35℃。酶的米氏常数为13mmol·L和48mmol·L一。与游离酶相比，固定化酶在复用性上具有优势。应用固定化酶测定了试样中铬含量。关键词：固定化；壳聚糖；醇脱氢酶；酶法测定中图分类号：0652．7文献标志码：APreparationandcharacterizationsofimmobilizedalcoholdehydr0genaseNINGJing，EPeng—fei，LIUChang—xian’(KeyLaboratoryforAnalyticalChemistryoftheStateEthn

3、icAfairsCommission，CollegeofChemistryandMaterialScience，South-CentralUniversityforNationalities，Wuhan430074，China)Abstract：Chitosanwasusedasasuppo~，alcoholdehydrogenase(ADH)wasimmobilizedbycrosslinkingcombination．TheoptimumconditionsofimmobilizationforADHwerethatehitosanw

4、ascrosslinkedwith0．6％glutaraldehydeandreactedwithADHfor2．5hintheenzymesolutionofpH6．8．ThestudyontheenzymaticcharacterizationsoffreeandimmobilizedADHindicatesthatoptimumpHvalueoftheenzymaticreactionwere8．2and8．4，thetemperatureswere34~Cand35~C，thevaluewere13mmol·Land48retoo

5、l·L～respectively．Itindicatedthattheimmobilizedenzymehasadvantageofreusestabilityoverfreeenzyme．Theimmobi—lizedenzymehasbeenusedtodeterminetracechromeinsample．Keywords：immobilization；chitosan；alcoholdehydrgenase；enzymaticdetermination固定化酶在保持高效催化反应特性的同时，本课题组从酶法测定的角度研究固定化酶的制

6、备还呈现出很多优点，七十年代以来对于固定化酶及性质，以微米级的壳聚糖作为载体，采用共价结的研究非常活跃⋯，其领域多为应用基础、工业生合法制备固定化醇脱氢酶(ADH)，该方法是将酶产等。酶法测定是具有高灵敏度和专一性的的非必需基团通过共价键偶联于固相载体上，即分析方法，但游离酶的催化反应易受高温破坏和载体的氨基和酶蛋白中的氨基在双功能试剂作用其他环境因素的影响。固定化酶能够回收重复利下，相互共价偶联成固定化酶J。本文探讨了用，稳定性较游离酶好，所以在分析测定方面也是ADH的固定化条件，进行酶催化动力学研究，并利研究热点rJ，但相对于其他领域

7、来说应用较少。用固定化酶测定了试样中的微量铬。收稿日期：2013-08—18；修回日期：2013·10-05基金项目：中南民族大学自然科学基金项目(X'ITAY)005)资助联系人简介：柳畅先(1956一)，女，教授，主要从事生化分析研究。E—mail：changxianliu@sin&conl第6期宁静，等：固定化醇脱氢酶的制备及性质865340nm测定吸光度变化值，计算固定化酶活力和1实验部分酶固载量。t)=AA×(Atxexb)，P=·In～，式中为酶1．1仪器与试剂活力(酶促反应速度，tzmol·min或u)；AA为吸752型紫外

8、可见分光光度计(上海光谱仪器有光度变化值；V为反应液体积(mL)；At为时间变限公司)，PHS-3C型精密pH计(上海雷磁仪器化值(min)；为摩尔吸收系数(L／mmol·em)；b为厂)，F