微生物限度检查法操作规程.ppt

《微生物限度检查法操作规程.ppt》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、微生物限度检查法操作规程质量检测中心张廷滔定义微生物限度检查法系检查非规定灭菌制剂及其原料、辅料受微生物污染程度的方法。检查项目包括细菌数、霉菌数、酵母菌数及控制菌检查。本检查法中细菌及控制菌培养温度为30℃～35℃；霉菌、酵母菌培养温度为23℃～28℃。检验结果以1g、1ml、10g、10ml、10cm2为单位报告，特殊品种可以最小包装单位报告。检查环境微生物限度检查环境在洁净度C级下的局部洁净度B级的单向流空气区域内进行。微生物限度检查室要求温度：18～26℃；相对湿度：45～65％；压差：洁净室与外界压差≥

2、30Pa培养基营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基胆盐乳糖培养基、4-甲基伞形酮葡糖苷酸培养基、曙红亚甲蓝琼脂培养基、营养肉汤培养基、四硫磺酸钠亮绿培养基、胆盐硫乳琼脂培养基稀释液和冲洗液0.1%蛋白胨水溶液pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液0.9%氯化钠溶液供试品的保存供试品在检验之前，应保存在阴凉干燥处，勿冷藏或冷冻，以防供试品内污染菌因保存条件不妥引起致死或繁殖。供试品在检验之前，应保持原包装状态，严禁开启。包装已开启的样品不得作为供试品。实验前的准备以头孢氨苄胶囊为例1.在《洁净室使用记录上》登记好头孢氨苄胶囊

3、的规格、批号；准备一张微生物限度检查空白记录，填好除检验结果以及温湿度外的其他必要信息。2.准备好相应的检查用品：营养琼脂培养基和玫瑰红纳琼脂培养基各1瓶融化后，放入烤箱中待用100mlpH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液1瓶9ml/管的pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液4支0.1%蛋白胨水溶液（500ml瓶）滤杯沉降菌平皿空白平皿-吸管、镊子、剪刀等放入不锈钢盒中经干热灭菌后待用3.配置消毒液0.1%洁尔灭溶液75%乙醇传递窗物料微生物限度检查室注：进入无菌检验室的样品若有两层包装的，需将外包装在传递窗或缓冲间拆除后，经

4、传递窗传入实验室。4.将待检样品以及的相关用品（包括培养基、缓冲液以及检测用器皿等），经传递窗紫外消毒60分钟后，再转运至微生物限度检查室。5.按空调机组上的"F2”键，开启空调；通过物流通道处的按钮，开启净化工作台。化验人员按照《进出微生物检测室更衣操作规程》进行正确的更衣。进入更鞋室→更鞋→脱去工作服及私人衣物（只剩贴身内衣、内裤）挂在衣钩上→并将所有头发塞入发网中固定→洗手→用手肘开门进入一更。然后取GEL溶液2～3ml，采用六步法对双手和手腕进行消毒（在30秒内保持双手完全被GEL覆盖）→用手肘开门进入C

5、级二更（黄色地面）。在二更更鞋，然后戴上绸帽，绸帽应包裹住全部头发；再戴上口罩，口罩必须覆盖嘴、鼻，在脑后勒紧；最后穿洁净区连体工作服，依次将左脚、右脚、左手、右手穿入（过程中应避免碰触洁净衣外表面，同时洁净衣也不得接触地面或墙面）→检查自己的着装→用手肘开门进入C级缓冲间。在C级缓冲间，用手肘开门分别进入C级微生物限度检查室一和检查室二，带上无菌手套，再在消毒液中浸泡约30秒。化验人员用浸泡了消毒液的无菌毛巾，擦拭净化工作台台面。打开传递窗，将相关的检查用品依次摆放在不锈钢桌上和净化工作台上。（镊子和剪刀应插入

6、75%酒精棉球中）准备7个沉降菌平皿，做好标记和日期在净化工作台上和检查室地面上摆放好沉降菌平皿。用消毒液清洗浸泡双手，将消毒毛巾贴好，放在净化工作台台面上。净化工作台2个检查室地面2个操作者手指1个消毒液1个空白对照1个供试液的制备原则根据供试品的理化特性与生物学特性，采取适宜的方法制备供试液。所用乳化剂，分散剂、中和剂或灭活剂及其用量应证明是有效的，并对微生物无毒性。供试液的制备若需用水浴加温时，温度不应超过45℃，时间不得超过30min常用的供试品制备方法液体供试品取供试品10ml，加pH7.0无菌氯化钠－

7、蛋白胨缓冲液至100ml，混匀，作为1：10的供试液。水溶性液体制剂也可用混合的供试品原液作为供试液。固体、半固体或粘稠液供试品称取供试品10g，加pH7.0无菌氯化钠－蛋白胨缓冲液至100ml，用匀浆仪或其他适宜的方法，混匀，作为1：10供试液。有必要时可适当加温（不应超过45℃）。供试液的制备取10g头孢氨苄胶囊于磨口瓶中，用无菌剪刀将其剪碎，加入100mlpH7.0无菌氯化钠－蛋白胨缓冲液混匀，作为1：10供试液。静止得上清液备用。在供试液静止沉淀的同时准备8个无菌平皿，每2皿为一组，分别在每组的2个平皿盖

8、上分别依次注明“0（空白）,10-1,10-2,10-3”。准备3瓶胆盐乳糖培养基，分别在瓶上注明”1-/2,1+/2,0/2",其中2标示当月2号，1表示当天所做的第一个样品、+：表示样品阳性，-：表示样品、0：表示阴性对照。细菌和控制菌检查薄膜过滤法制备平皿准备2个无菌平皿，倾注营养琼脂培养基约15-20ml，半盖盖，除出去冷凝水后，盖上平皿盖待凝。火焰喷射器在检验仪