微生物限度检查法操作规程

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1、SOPQC-038-02微生物限度检查法操作规程第3页共25页微生物限度检查法操作规程第1页共25页执行日期起草部门质量管理部文件编号SOPQC-038-02起草人审核人批准人起草日期审核日期批准日期分发部门：质量管理部1目的：建立微生物限度检查的基本操作，为微生物检查人员提供正确的操作依据。2范围：适用于药品的微生物限度检查。3责任：QC化验员、QC主任。4内容：依据《中国药典2005年版》、中华人民共和国卫生部《药品卫生检验方法》。细菌、霉菌和酵母菌计数1简述细菌、霉菌和酵母菌计数是检测非规定灭菌制剂及其原、辅料受到微生物污染程度的方法，也是评价生产企

2、业的药用原料、辅料、设备、器具、工艺流程、环境和操作者卫生状况的重要手段和依据。细菌、霉菌和酵母菌计数除另有规定外，均采用平板菌落计数法，这是活菌计数的方法之一，也是目前国际上最常用的一种方法。以琼脂平板上的细菌、霉菌或酵母菌形成的一个独立可见的菌落为计数依据。该法测定结果只反映在规定条件下所生成的细菌（嗜中温、需氧和兼性厌氧菌）、霉菌和酵母菌的菌落数，不包括对营养、氧气、温度、PH和其他因素有特殊要求的细菌、霉菌和酵母菌。一个细菌、霉菌和酵母菌的菌落数均可由一个或多个细菌生长繁殖而成。因此供试品中所测得的菌落数，实际为菌落形成单位（colonyformi

3、ngunity,cfu）不应理解为细菌、霉菌、酵母菌的个数。在进行本法测定时必须严格按本法所规定的条件操作，以免产生实验误差。2仪器、设备2.1设备天津安捷伦药业有限公司SOPQC-038-02微生物限度检查法操作规程第3页共25页2.1.1无菌室微生物限度检查应有单独的无菌室，每个无菌室应有独立的空气净化系统。2.1.1.1结构和要求见无菌检查法。2.1.1.2操作间操作间应安装空气除菌过滤层流装置。环境洁净度不应低于10000级，局部洁净度为100级（或放置同等级净化工作台）。操作间或净化工作台的洁净空气应保持对环境形成正压，不低于4.9Pa。操作台上

4、备有电子天平，乙醇灯，火柴，乙醇棉球，大、小橡皮乳头等。2.1.1.3缓冲间缓冲间内应有洗手盆，无菌衣、帽、口罩、拖鞋等。缓冲间内不得放置培养箱和其他杂物。2.1.1.4洁净级别及检查方法通常采用尘粒数和浮游菌数或沉降菌数测定法（参照《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测定方法》的现行国家标准进行洁净度验证。洁净级别尘粒数/m3浮游菌（个）/m3沉降菌（个）/（￠90mm·0.5h）微粒直径≥0.5μm微粒直径≥5μm100级≤3，500≤0≤5≤110000级≤350，000≤2000≤100≤3100000级≤3，500，000≤20，00

5、0≤500≤10沉降菌数测定（Ⅱ法）无菌室操作台消毒擦拭后，先启动层流净化装置30分钟，将备妥的营养琼脂平板3个（经30℃～35℃预培养48小时，证明无菌落生长），以无菌方式（或经传递箱）移入操作间，置净化台左、中、右各1个，开盖，暴露30分钟后，将盖盖上。在30～35℃培养箱内倒置培养48小时，取出检查。3个平板生长的平均菌落数不超过1个。有条件的单位，同时应检查操作间和净化工作台上的浮游菌和尘粒数，分别应达到10000级和100级。如菌落数或尘粒数超标，应清洗过滤系统中的过滤器，必要时予以更换。2.1.1.5在每次操作前、后用0.1%苯扎溴铵溶液或其他

6、消毒液擦拭操作台、地面及可能污染的死角，然后启动室内的层流净化装置，同时用紫外灭菌灯照射30分钟。2.1.2阳性菌试验应另设单独的净化工作台，不得在供试品检验用的无菌室内或净化工作台上操作。2.1.3无菌室与洗刷、灭菌消毒、培养、结果观察及办公室等配套设施应相对集中，布局合理，避免污染，便于管理。2.2仪器2.2.1恒温培养箱（30～35℃）、生化培养箱（23℃～28℃天津安捷伦药业有限公司SOPQC-038-02微生物限度检查法操作规程第3页共25页）、微波炉（或其他适宜加热装置）、康氏振荡器、匀浆仪（3000～8000r/min）、恒温水浴、离心机、电

7、热干燥箱（250℃～300℃）、电冰箱、高压蒸汽灭菌器（使用时要进行生物指示剂灭菌效果检查并应定期请有关部门检定。）、菌落计数器、显微镜（1500X）、电子天平、pH系列比色计。5.2.2.2玻璃器皿、锥形瓶（250～300ml，内装玻璃珠若干；500ml，1000ml）、培养皿（直径9cm）、量筒（100ml，500ml）、试管（18mm×180mm、28mm×198mm）及塞、吸管（1ml分度0.01，10ml分度0.1）、注射器（20ml或30ml）及针头、载玻片、盖玻片、带盖玻璃消毒缸、带盖不锈钢筒。玻璃器皿用前应用洗涤剂或清洁液浸泡，水洗3次。使

8、用过后如与细菌接触，应先灭菌倒出内容物后再清洗，晾干。吸管、量筒应