一种提取大鼠骨总RNA的改良方法.pdf

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1、中华实验外科杂志2014年9月第31卷第9期ChinJExpSurg，September2014．Vol_31．N0．9·1993··实验研究·一种提取大鼠骨总RNA的改良方法单冰晨张鹏刘禄林王沈栋董启榕【摘要】目的当经典Trizol法提取骨组织RNA不能满足实验要求时，使用盐溶液再处理提取的一种改良方法。方法对经典Trizol法提取的骨组织RNA，用异丙醇再沉淀时，加入柠檬酸钠、氯化钠混合盐溶液溶解，再抽提RNA。测定RNA纯度、浓度和完整性，聚合酶链反应(PCR)鉴定其有效性。结果重新提取的RNA能够被焦磷酸二乙酯(DEPC)水充分溶

2、解，盐溶液处理后的RNA浓度与处理前相近；处理后RNA的：。比值、A：3。比值分别为1．96±0．11、1．90±0．21，均分别显著高于处理前(1．52±0．05、0．27±0．08)；凝胶电泳示RNA完整性，逆转录后可扩增出目的基因。结论改良Trizol法重提的总RNA纯度较常规法显著提高，且完整性好，可以满足进一步分子研究的要求。【关键词】骨组织；RNA提取；大鼠OHeimprovedmethodfortheextracti0nOftOtalIAfromratboneShahBingchen．Zhang凡g，LiuLulin，Wan

3、gShendong，DongQirong．DepartmentofOrthopedics，SecondAfiliatedHospitalofSoochowUniversity．Suzhou2i5Oo4．ChinaCo~espondingauthor：DongQirong，Email：由r@szgk．netIAbstract】OhiectiveTointroduceonemethodtoimprovetheeffectofboneRNAextractionwhentheclassicalTrizolmethodcannotmeettheex

4、perimentalrequirements．MethodsTheconeentra—tion．purityandintegrityoftheextractedRNAweretested．TheRNAwasreverselytranscriptedintocDNA，asatemplatewhichwasthenamplifiedtoDNA．ResultsThere—extractedRNAcouldbefullydis—solvedbydiethylchlorophosphate(DEPC)water．Thismethodcouldeff

5、ectivelyreducetheinterferenceofmucincarbohydrate．Afterthepreventionofthesodiummixturesolution．theconcentrationoftheRNAwasslightlylowerthanthatbeforetheprevention．TherateofA26o／A280andA26o／A230ofRNAwasbothsignifi—eantlyhigherafherthepreventionthanthatbeforetheprevention[(1

6、．96±0．11)VS．(1．52±0．05)，(1．90±0．21)VS．(0．27±0．08)respectively]．AgarosegelelectrophoresisshowedtheRNAafterpre—ventionwascompleteandthepolymerasechainreaction(PCR)processioncouldsuccessfullyamplifythetargetedgene．ConclusionTheimprovedextractionmethodcouldinsurethepurity．con

7、centrationandin—tegrityofRNA．andmeettherequirementsformolecularresearch．【Keywords】Bonetissue；RNAextraction；Rats采用Trizol处理组织细胞提取RNA是近年来实酶链反应(PCR)System9700PCR仪(美国ABI公验研究中分子技术操作的一种常用方法。对于大部分司)，UV-2000紫外分光光度计(Unico公司)，电泳仪组织细胞样本，这种方法操作简单，可以提取出纯度较(Bio-RadPowerPPAC200，美国)，低温高速离

8、心机高、质量较好的总RNA¨J。然而对于骨组织，由于主(Heraeus公司)、紫外凝胶成像分析系(Bio．Rad公要成分是钙盐，骨细胞含量极少，不易充分碎解制成匀司)，焦磷酸二乙酯(DEPC，