苦参碱对SGC-7901和ECV304细胞增殖活性的影响.pdf

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1、经济市场苦参碱对SGC一7901和ECV304细胞增殖活性的影响赵健凯，王淑静，王镜伊，乔玉阁，黄蓉，杨子文，张文君(哈尔滨商业大学，黑龙江哈尔滨150076)摘要：通过体外实验研究苦参碱对人胃癌细胞株(SGC一7901)及人脐静脉内皮细胞(ECV-304)增殖活性的影响，进而研究苦参碱的抗肿瘤活性。关键词：胃癌；苦参碱；细胞增殖；细胞凋亡；内皮细胞苦参碱不但可以抑制肿瘤细胞的增殖，而且可以诱导肿瘤400txl无血清培养基，实验组各孔加浓度为500~g·ml的苦参细胞分化与凋亡、抗肿瘤浸润和转移等，因而在临床上被广泛碱400~1，在37℃，5％CO2培养箱中继续培养24h。

2、取出24孑L应用，苦参碱的浓度和作用时间不同，对胃癌细胞的增殖和凋板．每天对照组、实验组各取3个孔。在超净工作台中用PBS亡具有不同的影响。药物浓度越高、作用时间越长，都会增加细漂洗2次，在加入0．25％胰蛋白酶充分消化后，细胞悬液与胞凋亡的几率。本实验采用不同时间、不同剂量的苦参碱研究0．4％台盼蓝溶液以9：1混合混匀。(终浓度0．04％)，光镜下计其对胃癌细胞和血管内皮细胞的影响，对进一步研究苦参碱的数。分别多次计数求平均值．持续计数6天。分别绘制两种细胞抗肿瘤活性及机制具有一定的指导意义。对照组和实验组的细胞浓度一时间曲线。进行比较分析研究。1实验材料3结果(一)药品

3、与试剂(一)MYr法检测细胞存活率苦参碱(纯度≥99％)购自成都曼斯特生物科技有限公司：根据细胞的存活率数据可以得出．人胃癌细胞(SGC一7901)RPMI1640培养液、胎牛血清、胰蛋白酶购自Invitrogen公司：存活率随着苦参碱浓度的增加而下降，呈现药物剂量依赖性，溴化四氮唑蓝(MIrr)，台盼兰购自Sigma公司；二甲基亚砜说明药物对这种肿瘤细胞具有明显抑制作用。人胃癌细胞的存(DMSO)分析纯购自天津市博迪化工有限公司。活率随药物剂量增大而下降的趋势较明显。对于内皮细胞来(二)细胞株说，随着苦参碱浓度的增加而下降趋势不明显。趋于平缓。苦参人胃癌细胞株(SGC一7

4、901)，人脐静脉内皮细胞株碱对于人胃癌细胞(SGC一79011及人脐静脉内皮细胞(ECV一(ECV304)哈尔滨商业大学药学院保存。304)的IC50值分别为763~g·ml～、1888~g·ml～。2实验方法(二)生长曲线检测细胞生长曲线(一)M1Tr比色实验依据前期MTT的实验数据．本实验采用苦参碱给药浓度将对数生长期人胃癌细胞SGC一7901及人脐静脉内皮细为500~g·ml_。。在苦参碱浓度为5001xg·ml时可抑制两种细胞ECV一304用PBS漂洗2次，去除漂浮在培养基中的细胞，0．25％胰蛋白酶室温消化，用细胞计数板计数，调整细胞的浓度胞的生长。生长曲线图显

5、示加药后的第一天开始人胃癌细胞为5x104个／ml。将细胞悬液加到96孔板中。每：fL~m人100~l(SGC一7901)增殖受到抑制，从第三天开始抑制作用明显增加，第五天抑制作用达到最大。因此得出：在两种实验细胞中，该药细胞悬液，置于37qC，5％CO2培养箱中继续培养24h。将苦参碱的增殖抑制作用为SGC一7901>ECV一304。以每孔100~1的体积加入到预先设计好的96孔板中，终浓度4分析与讨论梯度为01xg·ml～，100~g·ml～，200~g·ml～，400txg·ml～，800~g·本实验研究目的是探究苦参碱对胃癌细胞和血管内皮细ml～，每个浓度设3个复孔

6、，空白对照孔加入同等体积的不含胞增殖活性的影响，因此选取人脐静脉内皮细胞(ECV一304)和血清的培养基，37℃，5％CO2培养箱中继续培养48h后，各孔加人胃癌细胞fSGC一7901)作为研究对象，采用MTr法和细胞入101浓度为5mg·ml的MTI"，置于37℃，5％CO2培养箱中生长曲线的方法进行研究。继续培养4h。吸弃含有MTI'的细胞培养液，每孔加入100~1二生长曲线实验表明苦参碱对于胃癌细胞抑制增殖作用较甲基亚砜(DMSO)溶液(避光)。用酶标仪在波长为490nm下测强，在给药的第二天细胞浓度开始下降，大约降低l0个百分定96孑L板每孑L的吸光度值。取平均值，

7、计算细胞存活率。点；而苦参碱对内皮细胞的增殖抑制作用则相对较弱，这与细胞存活率=各给药组吸光度值／空白对照组吸光度值XMTI'法的实验结果基本保持一致。在增殖抑制活性研究中，苦100％。参碱对两种细胞的增殖抑制作用为SGC一7901>ECV一304。苦参(二)生长曲线碱对胃癌细胞的生长有一定的抑制作用，而对内皮细胞的作用将对数生长期的人胃癌细胞SGC一7901及人脐静脉内皮影响较小，表明苦参碱对细胞生长抑制有一定的选择作用。细胞ECV一304用PBS漂洗2次，去除漂浮在培养基中的细胞．参考文献：然后加入适量浓度为0