培养基配制010

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1、------------------------------------------作者xxxx------------------------------------------日期xxxx培养基配制2016010【精品文档】实验报告：实验目的、实验原理、实验步骤等1、培养基母液的配制2、培养基的配制（包括灭菌、包裹）3、外植体灭菌及接种4、实验结果观察与分析5、继代培养基配制6、继代培养7、诱导发芽8、诱导生根9、驯化移栽10、收获及鉴定【精品文档】【精品文档】培养基母液配置（9-25）1.清洗器皿（初次使用注意事项）并晾干。2.配置N6培养基等母液（每种母液体

2、积100ml）3.培养皿（每人至少一个）清洗、晾干、报纸包裹、线绳捆扎、灭菌烘干4.蒸馏水灭菌天平的用法：水平调节；称重时需要关好天平所有玻璃窗。药品内部的塑料盖，记得盖上，如果不明，擦拭干净再盖上。定容：先称2/3体积水，然后顺序加试剂，前一试剂溶解后，加另一试剂，最后用滴定瓶定容。值日：清洁桌面、地面；所有物品使用后归位（天平盖上罩子）；座椅归位；不迟到早退，需要的克数=（0.166g/147g）*165g（含结晶水多少）N6培养基母液【精品文档】【精品文档】1）大量营养元素（本次配制10X，母液I，每组都做，每个培养皿可盛放培养基30毫升（25-35ml），一

3、个100毫升三角瓶可用于3个培养皿）：本次实验做100ml10x（稀释后可制成1升培养基，可用于33个培养皿）KNO30gCaCl2·2H2O0.166gMgSO4·7H2OKH2PO400g(NH4)2SO4注：配制时按表中所列顺序逐一添加，每种成分溶解后再溶解另外一种成分。1）B5微量母液：(母液II，第一组)1000ml(100X倍)含KI0.0750gH3BO300gMnSO4·H2O1.0000gZnSO4·7H2O0.2000gNa2MoO4·2H2O0.0250gCuSO4·5H2O0.0025gCoCl2·6H2O0.0025g【精品文档】【精品文档

4、】注：本次实验各试剂用量过少，精确度不够，可全班做100ml。天平用万分之一天平（十教649）。稀释后可供100升培养基配制1）B5有机母液（每种试剂，单独一个试管盛放，）：(母液III浓度，第二组，用于30个培养基的制作）烟酸（VB3，Nicotinicacid，单独试管盛放）1g/ml（每班0.002g，加入2ml蒸馏水，可制作60个培养基），）盐酸吡哆醇(VB6，单独试管盛放)01g/ml（每班0.002g，加入2ml蒸馏水，可制作60个培养基））盐酸硫胺素(VB1，单独试管盛放)10g/ml（每班0.002g，加入2ml蒸馏水，可制作60个培养基））肌醇(m

5、yo-Inositol，，单独试管盛放)10g/ml（每班称取0.2g，加入20ml蒸馏水,可制作60个培养基）4)铁盐：(母液IV，第三组)本次实验做：100ml(100X倍)FeSO4·7H2O【精品文档】【精品文档】Na2EDTA·2H2O注：配制顺序如下1.称取gFeSO4·7H2O溶解于20ml去离子水中（A）。2.称取gNa2-EDTA·2H2O溶解于20ml去离子水中（B）。3.将A置于70℃水浴锅中直至溶质完全溶解（C）。4.将A倒入C中混合，置于70℃水浴锅中保温2h（小时）。5.定容至100ml。5）激素（第四组）激素溶解方法母液浓度6-BA加稀

6、碱溶解（1MNaOH），再用蒸馏水定容1mg/mlNAA加碱溶解（1MNaOH），再用蒸馏水定容1mg/ml2，4-D加少量酒精溶解，再用蒸馏水定容（每班称取0.0050g，加入20毫升蒸馏水，可配置60个培养皿）0.00025mg/ml【精品文档】【精品文档】培养基配置及灭菌（10-13）移液器的使用实验步骤：1．灭菌，晾凉：培养皿、蒸馏水（开、关盖子）后，培养皿烘干。2．（2-3小时）培养基配制：母液称量、添加琼脂、调节pH、导入三角瓶（100ml培养基），灭菌，凉到50-60度左右，摇匀，分别注入培养皿（培养皿的一半，要厚，提供营养，一半3个培养皿需要100m

7、l）3．超净台风干后，保鲜膜包装，放入4度冰箱，可挑选一培养皿（包好）放于28度，进行污染观察。准备的药品（）（第一组）2，4-D加少量酒精溶解，再用蒸馏水定容0.25mg/ml10ml【精品文档】【精品文档】（第三组）1NNaOH（1~4N4g溶于100ml水中）（第三组）1NHCl（1~4Nml水中）（第一组）70%酒精（70ml酒精溶于30ml水） （一）培养基配方每3个培养基配100毫升培养液，分别放到三角瓶里，灭菌后，报纸封口，每100毫升含有：母液I：N6大量元素（10x，）：10ml母液II（B5微量）：1ml铁盐：1ml烟酸：0.1ml盐酸吡哆醇