电磁脉冲对小鼠脾细胞fas和faslmrna表达的影响

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1、电磁脉冲对小鼠脾细胞Fas和FasLmRNA表达的影响摘要:目的观察电磁脉冲对小鼠脾细胞Fas和FasLmRNA表达的影响.方法40只体质量（18±2）g的健康雄性BALB/c小鼠随机分为未照射组（8只）和全身照射组（32只）.小鼠连续2d接受每日25次脉冲的电磁脉冲全身照射，每次照射间隔约2min.于照射后2，4，8和12h分别取2只未照射小鼠和8只照射小鼠的脾脏.采用RNA打点杂交法检测小鼠脾细胞Fas和FasLRNA的表达水平，并对杂交信号进行灰度扫描后计算RNA表达指数.结果受电磁脉冲照射后2h，小鼠脾细胞Fas和FasL的RNA表达指数即分别从未照射的0.59±0.26和0.56±0

2、.23升高到0.97±0.25和0.96±0.21，4h又下降至0.75±0.24和0.69±0.22，8h再度上升达最高峰1.22±0.22和1.32±0.50（与对照组相比P<0.001），于12h时下降至接近正常水平.结论电磁脉冲辐照可引起小鼠脾细胞Fas和FasLRNA表达水平波动性升高.　　Keyagicpulse;Fas;FasL;nucleicacidhybridization　　Abstract:AIMToobservetheeffectsofelectromagicpulseonmRNAexpressionofFasandFasLinmurinesplenocytes.

3、METHODSFortymaleBalb/cmiceassof（18±2）glydesignatednon-irradiationgroup（8mice）andice）.Micereceivedirradiationofelectromagicpulsefortinutesinterval.Ticeand8irradiatedmiceoved2hours，4hours，8hoursand12hoursafterirradiation，respectively.RNAdotblottingassayployedtoexaminetheexpressionlevelsofFasandFasLgen

4、einmurinesplenocytes.Positivesignalsurinesplenocytesin-creasedmarkedly2hafterEMPirradiation，0.97±0.25vs0.59±0.26forFasand0.96±0.21vs0.56±0.23forFasL.Hoallevel.CONCLUSIONEMPirradiationcancauseanundulatoryincreasingexpressionofFasandFasLinmurinesplenocytes.　　0引言　　电磁脉冲（electromagicpulse，EMP）源于核爆炸的电磁波，它

5、对电子仪器的破坏作用已为世人所公认，但对其生物学效应尚知之甚少.我们发现，EMP辐照可致离体培养的小鼠脾细胞发生凋亡.Fas及其配体FasL为介导细胞凋亡的一对膜蛋白，FasL与Fas结合可导致表达Fas的细胞发生凋亡.研究表明，Fas-FasL相互作用是机体清除活化T淋巴细胞，维持免疫自稳的重要机制［1］.为进一步探讨EMP对哺乳动物免疫系统的效应，我们借助核电磁脉冲有界波模拟器照射小鼠的模型，采用RNA打点杂交法观察EMP辐照对小鼠脾细胞Fas和FasLmRNA表达的影响.　　1材料和方法　　1.1材料　　电磁脉冲有界波模拟器;Trizol（Gibco公司），DEPC和T4多核苷酸激酶（S

6、igma公司），［γ-32P］ATP（北京亚辉公司），寡核苷酸合成于上海生物工程公司.健康雄性BALB/c小鼠，体质量（18±2）g，本校实验动物中心提供.　　1.2方法　　40只小鼠随机分为未照射组（8只）和全身照射组（32只）.采用电磁脉冲有界波模拟器对小鼠进行照射，照射参数:自由体位，脉冲半宽340ns，前沿24ns，场强为40kV・m-1的EMP每日25次脉冲全身照射，每次照射间隔约2min，连续照射2d.照射后2，4，8和12h分别取8只照射小鼠和2只未照射小鼠的脾脏，立即冻存于液氮中.小鼠脾细胞总RNA的提取按文献［2］及Trizol说明书进行.探针标记参照文献［3］

7、进行，小鼠寡核苷酸探针Fas（5′GGAGAATCGCAGTAGAAGTCTGGTTTGCAC3′），FasL（5′CGGTAGCCACAGATTTGTGTTG-TGGTCCTT3′），β-actin（5′ACACCTTGGTGC-CTAGAGCGGCCCACGATG3′）经T4多核苷酸激酶标记γ-32P.RNA打点杂交:将RNA样品与甲酰胺、甲醛、20×SSC按体积比10∶20∶7∶2比例混合后