肾实质性高血压insr基因第8外显子多态性分析

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1、肾实质性高血压INSR基因第8外显子多态性分析【关键词】高血压［摘要］目的探讨肾实质性高血压胰岛素受体（INSR）基因第8外显子多态性，试图从遗传角度寻求病因。方法采用多聚酶链反应（PCR）和限制性内切酶片段长度多态性分析（RFLP）的方法对38例肾实质性高血压肾功能正常者(RHNRF)、45例肾实质性高血压肾衰竭者(RHCRF)及38例正常血压者(NC)全血INSR基因第8外显子NsiⅠ多态性进行分析检测。结果未发现中国人肾实质性高血压INSR基因第8外显子NsiⅠ多态性改变，两病人组N2等位基因频率与正常对照

2、组比较无显著性差异（χ2=0.06、0.08，P>0.05）。结论INSR基因第8外显子NsiⅠ多态性与中国人肾实质性高血压无关，N2等位基因并非其易感基因。［关键词］高血压，肾性；肾衰竭，慢性；受体，胰岛素；聚合酶链反应；限制性片段长度多态性［ABSTRACT］ObjectiveToinvestigatetherelationshipbetorphismofinsulinreceptor(INSR)geneExon8andtheetiologyofrenalhypertension.MethodsPoly

3、merasechainreaction(PCR)binedentlengthpolymorphism(RFLP)orphismofINSRgeneExon8in38renalhypertensivepatientsalrenalfunction(RHNRF),45patientsplicatedbychronicrenalfailure(RHCRF)and38normalcontrols(NC).ResultsNopolymorphismofNsiⅠinINSRgeneExon8orphismofINSRgene

4、Exon8hasnorelationerasechainreaction;restrictionfragmentlengthpolymorphism高血压病人中由肾脏病引起者约占10%，继发性高血压病人中肾脏病引起者占第一位，原发性高血压（EH）中约20%最终发展至终末期肾病［1］。虽然关于高血压肾损害及肾脏疾病引起高血压的研究甚多，但对其确切的发生机制，至今未能完全阐明。本研究拟通过限制性内切酶片段长度多态性分析的方法，对肾实质性高血压病人的全血胰岛素受体(INSR)基因第8外显子多态性进行分析，从分子水平探讨

5、肾实质性高血压的病因。1资料与方法1.1对象与分组1.1.1肾实质性高血压肾功能正常（RHNRF）组38例，男18例，女20例，年龄25~68岁，平均（45.9±11.3）岁。①收缩压＞18.67kPa，舒张压＞12.00kPa；②肾活检诊断为各种肾实质性疾病引起的高血压，除外肾血管性高血压；③尿常规异常，血尿素氮（BUN）、肌酐（Cr）尚在正常范围。1.1.2肾实质性高血压肾衰竭（RHCRF）组45例，男23例，女22例，年龄23~69岁，平均年龄（46.3±12.7）岁。①、②同RHNRF组，③血BUN＞20

6、mmol/L，Cr＞445μmol/L。1.1.3正常对照（NC）组38例，男20例，女18例，年龄27~60岁，平均（42.9±8.7）岁。收缩压＜18.67kPa，舒张压＜12.00kPa，排除肾脏疾病及糖尿病，亦无高血压、肥胖及糖尿病家族史。1.2方法1.2.1临床及生化检查病人均询问病史，测量血压、身高及体质量，计算体质量指数（BMI）；取空腹静脉血，用自动生化仪测定肾功能及血脂情况。1.2.2INSR基因第8外显子多态性测定①DNA提取：取静脉全血5mL，用100g/LEDTA抗凝，采用美国Promeg

7、a公司提供的DNA提取试剂期徐岩，周海燕，马瑞霞肾实质性高血压INSR基因第8外显子多态性分析59盒提取DNA。②PCR反应：引物设计参照文献［2］方法，由上海生物工程研究所合成。上游引物序列：5′CGGTCTTGTAAGGGTAACTG3′，下游引物序列：5′GAATTCACATTCCCAAGACA3′。PCR反应体系25μL（DNA模板150ng、dNTP200mol/L、上下游引物分别为20pmol、10×Buffer2.5μL、MgCl22.5μL、TaqDNA聚合酶1U），PCR反应条件为：94℃预变性

8、3min；然后94℃30s，55℃30s，72℃1min，共35个循环；最后72℃延伸5min。③酶切：取PCR产物20μL用限制性内切酶NsiⅠ进行酶切，酶切产物经20g/L琼脂糖凝胶电泳，紫外线显影、摄片。1.2.3统计学处理采用SPSS10.0forWindows统计软件对资料进行统计分析。计数资料及组间频数的比较采用χ2检验；计量资料以±s表示，组间比较采用方差分