凝血酶原时间和活化部分凝血活酶时间测定的问题

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1、凝血酶原时间和活化部分凝血活酶时间测定的问题【摘要】就目前玻片法凝血时间和Duke氏出血时间测定已淘汰，迄今凝血试验中的凝血酶原时间(PT)和活化部分凝血活酶时间（APTT)测定已有公认的标准化方案，简要介绍此两种时间测定的方法、标本采集、注意事项、临床意义等。【关键词】凝血酶；时间测定；凝血活酶　　血栓与止血实验室检查的临床重要性与日俱增，检验内容不断扩大，工作量也日益增多，不断出现方法更新和试剂商品化、操作自动化，改变了以往靠手工操作、自配试剂、工作效率低的局面。过去的玻片法凝血时间和Duke氏出血时间测定已淘汰，迄今凝血试验中的凝血酶原时间(PT)和活化部分凝血活酶时间(A

2、PTT)测定已有公认的标准化方案［1］，并成为实验室检查的常规项目。　　1玻片法凝血时间和Duke氏出血时间测定已淘汰　　1.1凝血时间凝血时间是检测“内源”凝血系统相关因子缺陷的简易过筛试验。目前国内广泛使用的玻片法很不敏感，国外早在60年代即已淘汰。即使是被认为是较好的试管法，对第Ⅷ、第Ⅸ9因子缺乏病例的阳性率也不高，而且操作繁琐。某些出血性疾病需要查凝血时间时，现已改用APTT代替［1］。　　1.2出血时间出血时间是一种检测血小板数量、功能和毛细血管功能的过筛试验。目前我国临床常规实验室普遍采用的Duke氏法，甚不敏感。少数出血性疾病，例如血小板减少及功能异常及血管性血友病

3、(vWD)等需要作BT时，应采用出血时间测定器法(改良的Ivy法)；后者要求患者在上臂缚压脉带，充气并维持一定压力，再用特制的刺血刀具(目前这种刀具主要靠进口)，切一标准切口，记录出血时间。操作繁琐、费时，不能列为常规。该法影响因素很多，Crowley等列举的主要因素有:技术操作、切口的方向和部位、皮肤的温度和Hct，特别是后者影响较大［2］。1991年LIND在《BLOOD》杂志上，发表了题为“出血时间不能预测外科出血”的文章［3］。1990年RODGERS和LEVIN也发表了文章，认为出血时间要重新评价［4］。该二文收集了大量评价出血时间临床应用价值的文献资料，认为这种方法(

4、包括出血时间测定器法)对某些出血性疾病，特别是用于手术前预测出血，敏感性和特异性均不强。因此在外科术前不必将出血、凝血时间作为常规［1］。如果少数有出血史或出血体征，需作该项检查时，凝血时间改用APTT，出血时间用正规的出血时间测定器法。下面就简要介绍凝血酶原测定和部分活化凝血活酶测定的方法、原理和注意事项等［1］。9　　2PT测定　　2.1原理将凝血活酶和钙离子加到枸椽酸钠抗凝血浆中，37℃保温，测定血浆凝固时间(PT)。如果患者凝固时间延长，表示血浆中缺乏(或降低)某一种或几种凝血因子。本法主要用于过筛检测外源凝血途径依赖维生素K的第Ⅱ、第Ⅶ、第Ⅹ因子。另外，第Ⅴ因子和纤维蛋

5、白原缺乏以及存在相关因子的抑制物时，也可出现异常结果。　　2.2血液标本的采集、运送及贮存［1］用一次性塑料采血器或硅化玻璃注射器采静脉血液；采血技术要熟练，不可过多损伤血管及周围组织，致使组织液混入血液中；采血时止血带不可束缚过紧，并不应超过5min；针筒内见到血即应解开止血带，否则某些凝血及纤溶因子会活化，并可使红细胞比积(Hct)升高；血与枸椽酸钠抗凝剂按9∶1混合，轻轻颠倒混匀，防止不洁的试管和不合格橡皮塞的污染。贮血应用清洁塑料管或硅化玻璃管或其他不沾湿的容器，避免接触活化凝血因子；取得血液后应尽快送到血液检验室。在运送中应避免剧烈振动和日光直射；一般要求自采血到测定不

6、得超过4h，不可久贮；如在室温中贮存过久，第Ⅴ因子会破坏;另一方面，在4℃贮存过久，会导致第Ⅶ因子活化。实验室在取得血样后应尽快分离血浆并尽快测定；血液如发现凝固，应弃去不用。9　　2.3标本制备PT和APTT试验都必须用乏血小板血浆（PPP），分离血浆时要求相对离心力（2000～2500）Xg，离心30min。用浊度法测定终点的自动化凝血仪，溶血和较明显的黄疸及脂血均会影响测定结果。　　2.4造成结果错误的原因［1］　　2.4.1与标本或样品有关的问题血标本收集管注入血液过多或不足；患者红细胞比积>55%时未校正枸椽酸盐液体积；用了非规定的抗凝剂(如EDTA或草酸盐)或未

7、加抗凝剂，或抗凝剂浓度不准确；用了已凝固、溶血、黄疸或脂血样品；血标本混匀不当或剧烈的混匀；采血器或贮血管不洁，已受到污染；污染了肝素。　　2.4.2分析前的问题血标本送验延误或用了不合规定的容器和方法运送、处理或贮存血标本。　　2.4.3与试剂有关的问题试剂己被污染；复溶时水或稀释剂加量不准确；复溶时未用规定的溶液；试剂在运输、贮存过程中由于处理不当而变质；试剂复溶后超过了规定的稳定期或试剂己超过有效期。　　2.4.4分析过程的错误9如保温时间不准确、温度、加试剂量以及操作步骤