肺结核病人dna低甲基化趋势与dna去甲基化酶的相关性研究

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1、中＠聲３钟《版硕±研究生学位论文■北京协和医学院研究生院中国医学科学院北京协和医学院硕±学位论文学校代码：１００２３学号：Ｓ２０１２０３５００４硕±学位论文肺结核病人ＤＮＡ低甲基化庭势与ＤＮＡ去甲基化巧的相巧性研究所院：中国医学科学院病原生物学研究所姓名：张洪静指导教师：刘海鹰副研究员导师小组：刘海鹰副研巧员学科专业：免疫学研究方向；肺结核病人宿主基因甲基化影响因素的研究完成日期：２０１５．０５中国医学科学院北京协和医学院硕

2、±学位论文目录摘要１Ａｂｓｔｒａｃｔ３缩略減５６引言－、肺结核病面临新的挑战，宿主免疫应答能力与肺结核病的密切关联是战胜新挑战的ｎｍ７二、ＤＮＡ甲基化对宿主免疫系统起着重要调节作用１０Ｓ、课题姐在前期实验中发现肺结核病人呈现ＤＮＡ低甲基化趋势１１四、ＤＮＡ甲基化水平受ＤＮＡ去甲基化酶及ＤＮＡ甲基化转移酶调控１２於１７第一部分１７活动性肺结核病人及健康人全血ＲＮＡ中ＤＮＡ去甲基化酶及ＤＮＡ甲基化转移酶表达量的分ｔｆ

3、１７一、实验材料和方法１７二、实验结果２３三、小结２５第二部分２６５４９－体外刺激Ａ、Ｂｅａｓ２Ｂ细胞探讨ＤＮＡ去甲基化酶及ＤＮＡ甲基化转移酶对ＤＮＡ低甲基化趋势的影响２６一２６、实验材料和方法二、实验结果３３Ｈ、小结３８職３９一、肺结核病人ＤＮＡ去甲基化酶影响ＤＮＡ低甲基化趋势的相关性分析３９二、肺结核病人的低甲基化趋势可能通过増强免疫应答来影响疾病的发生发展４０Ｈ、ＤＮＡ去甲基化酶及ＤＮＡ甲基化转移酶在同种刺激物刺激过的不

4、同细胞中差异表达的趋势及种类不同４１ＩＳ论４２中国医学科学院北京协和医学院硕±学位论文参考女献４３致谢４９独创性声明和学位论文版权使用授枚４８中国医学科学院北京协和医学院硕±学位论文搞要肺结核病（ｐｕｌｍｏｎａｒｙｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ，ＰＴＢ）是由结核分枝杆菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ一ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓＡ）感染引起的，Ｍ种与机体细免疫应答密切相关的慢性感染性疾病，在肺结核病的发病过程中，细胞介导的抗原特异性免疫应答发挥着重要作

5、用。当结核分枝杆菌感染机体时，抗原递呈细胞（ＡｎｔｉｇｅｎｒｅｓｅｎｔｉｎｃｅｌｌｓＡＰＣ）将结核分枝ｐｇ，－－ＣＤ８０双途径激活Ｔ淋己细胞杆菌抗原通过抗原ＭＨＣ分子复合物和ＣＤ２８，同时一－１２－－分泌正、正１等细胞因子，进步刺激免疫细胞释放效应分子如ＴＮＦａ等Ｗ杀灭结核分枝杆菌。ＤＮＡ甲基化修饰作为动植物体内一种重要的表观遗传修饰形式，参与免疫应答反应的调控，对肿瘤性疾病、慢性感染性疾病、自身免疫性疾病等多种疾病的发生发展中起着重要的作用。而ＤＮＡ甲基化主要通过ＤＮ

6、Ａ甲基化转移酶（ＤＮＡｍｅ也ｒａｎｓｆｅｒａｓ的ＤＮＭＴ１、ＤＮＭＴ３Ａ、ＤＮＭＴ犯）上调ＤＮＡ甲基化水平ｙｈ，；通过ＤＮＡ去甲基化酶（ＴＥＴ１、ＴＥＴ２、ＴＥＴ３、ＴＤＧ）下调ＤＮＡ甲基化水平，两方面的调节共同维持ＤＮＡ甲基化水平的高低。课题组在前期通过全基因姐ＤＮＡ甲基化芯片研究发现，肺结核病患者宿主基因普遍呈低ＤＮＡ甲基化状态一ＤＮＡ甲基。为进步探索肺结核病人化调节的分子机制、研究肺结核病人ＤＮＡ低甲基化状态的影响因素，本研究在前期研巧结果的基础上，收集健康对照（Ｙ干

7、扰素释放实验，即ＩＧＲＡ阴性）和活动性肺结核病人治Ｒｅａ－疗前全血ＲＮＡ，通过实时巧光定量ＰＣＲｌｔｉｍｅＰＣＲ方法，首先对参与ＤＮＡ甲（）基化下调的ＤＮＡ去甲基化酶的４个基因进行定量检测，Ｗ初步明确ＤＮＡ低甲基化状态与ＤＮＡ去甲基化酶之间的关系。结果发现，在肺结核病人组中，参与下调ＤＮＡ甲基化水平的４个基因（ＴＥＴ１、ＴＥＴ２、ＴＥＴ３、ＴＤＧ）表达均显著升高（Ｐ值＜０．０５）。为了全面探讨肺结核病人ＤＮＡ低甲基化状态的影响因素，我们又对可Ｗ被动影响ＤＮＡ低甲基化状态的ＤＮ

8、Ａ甲基化转移酶的３个基因（ＤＮＭＴ１、ＤＮＭＴ３Ａ、ＤＮＭＴ３Ｂ）进行了定量检测，结果发现：只有ＤＮＭＴ１表达显著升高（Ｐ值＜０．０５）。一为了进步验证７ＲＶＡ甲５－，我们利用Ｈ３裂解抗原Ｗ及体外降低ＤＮ基化水平的氮杂胞嚼巧核巧（５ａｚａｃ－２Ｂ）刺激物刺激Ａ５４９、Ｂｅａｓ两种细胞系，并收集刺激后不同时间点细胞ＤＮＡ、ＲＮＡ。利用甲基化敏感性限制性分析（ＭＳＲＡ）对所收集ＤＮＡ样本进行分析，结果表明，拟７Ｒｖ抗原、５ａｚａｃ导致ＤＮ