琼脂糖膜固载辣根过氧化物酶催化还原过氧化物的研究.pdf

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1、·146·化学世界2016正琼脂糖膜固载辣根过氧化物酶催化还原过氧化物的研究李业梅，陈伟(郧阳师范高等专科学校a．生物化学与环境工程系；b．规划建设处，湖北十堰442000)摘要：用琼脂糖(agarose)水凝胶将辣根过氧化物酶(HRP)固定在玻碳电极(GCE)表面，制备了HRP—Agarose膜修饰电极。在水一乙醇混合溶液中，包埋在琼脂糖水凝胶中的HRP可以与电极直接传递电子，并且能催化还原H。O、过氧化丁酮、氢过氧化叔丁基、氢过氧化异丙基苯等过氧化物和NO。HRP—Agarose膜修饰电极具有较好的稳定性和重现性，可用于

2、上述过氧化物和亚硝酸盐的定量检测。关键词：辣根过氧化物酶；电催化；过氧化物；亚硝酸盐；琼脂糖膜中图分类号：0657．1；Q51文献标志码：A文章编号：0367-6358(2016)03—0146—03StudyonElectrocatalysisofPeroxidesbyHorseradishPeroxidaseEntrappedinAgaroseHydrogelFilmLIYe—mei。CHENWei(Teachers’CollegeofYunyang，a．DepartmentofChemistry；6．Construct

3、ionPlanning，HubeiShiyan442000，China)Abstract：Horseradishperoxidasewasimmobilizedonthesurfaceofaglassycarbonelectrode(GCE)byagarosefilm．Horseradishperoxidaseentrappedintheagarosefilmunderwentafastdirectelectron—trans—fer-reactioninwater-ethanolsolventmixture，andshow

4、edelectrocatalyticpropertiestowardsperoxides，suchashydrogenperoxide，cumenehydroper—oxide，t—butylhydroperoxide，2一butanoneperoxideandnitricoxide．Theimmobilizedhorseradishperoxidasehadgoodstabilityandreproducibi¨ty，whichcouldbeap—pliedtothedeterminationoforganicperoxi

5、desandnitrites．Keywords：horseradishperoxidase；electrocatalysis；peroxide；nitrites；agarosehydrogelfilm本文是在文献[1]研究的基础上，进一步研究了有限公司)，PHS一25型酸度计。琼脂糖水凝胶固定化辣根过氧化物酶在磷酸盐／乙辣根过氧化物酶(HRP，上海东风生物制品公醇混合溶液中对过氧化物(过氧化氢、过氧化丁酮、司)适量溶于10mmol／LpH一7．0的磷酸盐缓冲溶氢过氧化叔丁基、氢过氧化异丙基苯)和一氧化氮的液中，制成HRP溶液

6、。实验中使用的缓冲溶液为电催化行为，HRP—Agarose膜修饰电极可用于有机0．1mol／L酒石酸盐(pH值为3．0～6．0)，磷酸盐过氧化物和亚硝酸盐的定量检测。(PBS)KH2PO4～Na2HPO4(PH值为7．0～8．0)。琼1实验部分脂糖溶解于沸水中，配成0．4(质量分数)的水凝1．1主要仪器和试剂胶，与蛋白质溶液混合前，加入N，N一二甲基甲酰胺CHI660型电化学工作站(上海辰华仪器公(DMF)，加速凝胶化过程。过氧化丁酮(BP，Sig—司)，SY1200型超声仪(上海声源超声波仪器设备ma)、氢过氧化叔丁基(B

7、HP，Sigma)和氢过氧化异收稿日期：201412—01；修回日期：2016—0127作者简介：李业梅(1964一)，女，湖北十堰人，教授，主要从事生物电化学研究。Email：yemeili66@126．com。第3期化学世界丙基苯(CHP，Sigma)配制成乙醇溶液。H。0。浓度2结果与讨论用KMnO法标定，HO。贮备液在4℃条件下保2．1催化还原H。O。存，使用前用水稀释。其它试剂均为分析纯，实验用HRP—Agarose／GC在pH一7．0的PBS一乙醇的水为二次蒸馏水。除氧混合溶液中，加入HO。后，还原峰电流明显增1

8、．2实验方法大[见图1(a)]，且随H。O浓度的增大而增大。而1．2．1HRP一琼脂糖膜修饰电极的制备在同样条件下，裸电极和琼脂糖修饰电极在Hzoz玻碳电极(GC)用0．05btm粒度的a—A10。悬溶液中均未观察到H。0。的还原峰，说明固定在电浊液在抛光布上抛光，洗去表面污物，在二次蒸馏