硫化氢下调MMP-9的表达抑制肝癌HepG2细胞的迁移.pdf

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1、·1676·中国药理学通报ChinesePharmacologicalBulletin2013Dec；29(12)：1676～9网络出版时间：2013—11—1415：16网络出版地址：http：／／www．cnki．net／kcms／detail／34．1086．R．20131114．1516．012．html硫化氢下调MMP一9的表达抑制肝癌HepG2细胞的迁移杨云，董琳，黄圣旺，王义刚，秦春宏(南华大学1．附属第二医院、2．肿瘤研究所，湖南衡阳421001；3．浙江省苍南县人民医院，浙江温

2、州325800)doi：10．3969／j．issn．1001—1978．2013．12．012Hs可以抑制心血管平滑肌细胞的迁移J。为此，文献标志码：A文章编号：1001—1978(2013)12—1676—04本研究以硫氢化钠(NariS)为Hs的供体，探讨HS中国图书分类号：R329．2；R394．2；R735．702．2；R916．3对肝癌HepG2细胞迁移的影响及发挥作用的可能摘要：目的研究硫化氢(H，S)对人肝癌HepG2细胞迁移及分子机制。MMP-9表达的影响。方法划痕愈合和Tra

3、nswell实验检测1材料与方法HS供体硫氢化钠(NariS)对HepG2细胞迁移的影响；1．1试剂与试药硫氢化钠(Narts)固体购自美国Westernblot检测NaHS对HepG2细胞MMP一9表达的影响。Sigma公司，MMP一9山羊抗兔一抗购自Epitomics，二结果划痕实验结果显示，200和400~zmol·L的Naris作片】HepG2细胞16h后，较未处理组划痕距离明显增加(P<抗购自碧云天公司，DMEM培养基购自Hyclone，小0．05)，表明Hs可抑制HepG2细胞的愈合

4、能力。Transwell牛血清购自四季青生物公司，Transwell小室(3422实验结果显乐，100、200和400Ixmol·L的NaHS作用型)购白Coming。HepG2细胞24h后，穿膜细胞数分别为(18．3±1．16)、1．2细胞与细胞培养人肝癌细胞株HepG2细胞(16．3±1．52)、(12．3±0．58)个，较未处理组的(24．0±用含10％小牛血清的DMEM，培养于37C(=，5％1．73)个明显减少(P<0．05)，表明H，S口『抑制HepG2细胞CO的恒温培养箱，每2～3

5、d传代1次。迁移。Westernblot结果显示，100、200和400I~mol·I的1．3细胞划痕愈合实验检测细胞愈合能力将1NariS作用HepG2细胞24h后，MMP一9蛋白表达明显降低×10。个HepG2细胞接种在6孔板中，常规培养至(P<0．05)。结论H，S可抑制人肝癌HepG2细胞的迁移，细胞90％融合状态，用1％小牛血清DMEM将细胞其机制可能与下凋MMP一9有关。饥饿过夜，弃去培养基，用PBS漂洗3次，用灭菌的100txlTip头在培养板底部呈一字形划痕，用无血关键词：硫化氢

6、；硫氢化钠；肝癌；HepG2细胞；细胞迁移；清培养基漂洗3次，分别加入含有不同浓度NarisMMP一9的新鲜含1％小牛血清DMEM，37℃，5％CO，的恒温培养箱中培养，镜下观察划痕区细胞的迁移情况，肝细胞肝癌(hepatocellularcarcinoma，HCC，简分别于划痕后的0及16h拍照并用ImageJ计算其称肝癌)是我国最常见的恶性肿瘤，据相关资料统迁移距离，实验重复3次。汁，在全球死亡的肝癌患者中有一半发生在我国J。有研究表明，肿瘤细胞早期侵袭转移是恶性1．4Transwell实验

7、检测细胞迁移能力采用孔径8．0m的24孔板Transwell小室(3422型)(Cor—肿瘤患者死亡的重要原因之一，也是导致肝癌患者ning公司)。用无血清、无抗生素的培养基DMEM治疗失败的主要原因之一。因此，研究如何防治配制浓度为1X10个·L的单细胞悬液。将200肝癌细胞侵袭、转移是该领域的热点和难点。硫化l细胞悬液加入Transwell小室迁移系统的上室中，氢(H，S)是目前被公认为的神经系统和心血管系统下室加入含双抗、10％小牛血清以及新鲜不同浓度中重要的气体信号分子I4，并且在胃肠道

8、也发挥的NaHS的新鲜培养基DMEM共750Ixl，放入着重要的病理生理学作用J。近年来有研究发现，37℃，5％CO，的培养箱中培养24h。取出小室，甲收稿日期：2013—08—24，修回日期：2013—09—26醛固定30min，甲紫染色20min，水洗，用棉签擦去基金项口：国家自然科学基金资助项目(No81172365)；浙江省温州未穿过滤膜的细胞，室温晾干，在光镜下观察穿过小市生局资助项目(No2013A17)室8I．zm孔到达杯底下面的细胞数目，并随机于镜作者简介：杨厶(1986一)，男