脑源性神经营养因子对丙烯酰胺致NB-1细胞损伤的保护作用.pdf

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1、毒理学杂志2014年8月第28卷第4期JToxicolAugust2014Vot．28No．4·259·中圈分类号：R135．1文献标识码：A文章编号：1002—3127(2014)04—0259—06·论著·脑源性神经营养因子对丙烯酰胺致NB一1细胞损伤的保护作用肖经纬，孙彦彦，王秀会，陈宵，张斌，李斌(中国疾病预防控制中心职业卫生与中毒控制所，北京100050)【摘要】目的在体外实验条件下探讨脑源性神经营养因子(brain．derivedneurotrophicfactor，BDNF)对丙烯酰胺(aerylamide，ACR)所致神经损伤的干预效应。方法M

2、TT法检测不同剂量ACR(0、10、20、4O、6O、80和100g／m1)作用时NB-1细胞的相对存活率并计算半数抑制浓度(IC)；根据ACR细胞毒性测试结果设对照组、ACR染毒组(60g／／mlACR)、BDNF干预组：BDNF1(50ng／mlBDNF+6Og／mlACR)、BDNF(75ng／mlBDNF+60g／mlACR)、BDNF(100HS／mlBDNF+60g／mlACR)；光学显微镜观察神经细胞形态变化，MTT法检测细胞相对存活率，流式细胞术检测胞内游离钙离子浓度；Western-blot检测突触素I(synapsinI)蛋白表达。结果AC

3、R对NB．1细胞的IC为69．8g／ml(48h)。50和75ns／mlBDNF对ACR所致神经损伤具有一定的干预作用，与6Og／mlACR单独染毒组比较，神经细胞形态异常减轻，细胞相对存活率增加，胞内钙离子浓度降低，synapsinI蛋白含量增加(P<0．05)；BDNF剂量增加到一定水平(100ns／m1)，干预效果减弱，细胞相对存活率、胞内钙离子浓度及synapsinI蛋白表达与60g／mlACR单独染毒组差异无统计学意义(P>0．05)。结论适当剂量的BDNF在体外条件下对ACR所致神经损伤具有一定的保护作用，可能是通过对抗胞内钙超载，上调synaps

4、inI蛋白表达，维持突触结构完整来实现的。【关键词J丙烯酰胺；脑源性神经营养因子；突触素I；胞内游离钙Studyoneffectsofbrain-derivedneurotrophicfactorinacrylamide-inducednerVedamageinvitroXIAOJing·wei，SUNYan—yah，WANGXiu—hui，CHENXiao，ZHANGBin，LIBin(NationalInstituteofOccupationalHealthandPoisonContro1．ChineseCenterforDiseaseControland

5、Prevention，Beijing100050。China)【Abstract】ObjectiveThepresentstudywasdesignedtoinvestigatetheeffectsofbrain-derivedneurotrophicfactor(BDNF)onacrylamide(ACR)一inducednervedamageinvitro．MethodsNB—IceilsweretreatedwithgradedconcentrationsofACR(0，10，20，40，60，80and100V．g／m1)f0r48h．Relative

6、survivalratewasmeasuredbyMTTandIC5awascalculated．AccbrdingtotheresultsofeytotoxieityofACRonNB-1cells，threegroupswereset，whichwerecontrolgroup，60g／mlACRtreatmentgroupandBDNFinterventiongroups：BDNFl(50ng／mlBDNF+60~g／mlACR)，BDNF2(75ng／mlBDNF+60I~g／mlACR)，BDNF3(100ng／mlBDNF+60g／mlACR)．M

7、orphologicalchangesofcellswereobservedbylightmicroscopy．RelativesurvivalratewasmeasuredbyMTT．Proteinlevelofsynapsin1wasmeasuredbywesternblotting．[ca“]iwasmeasuredbyflowcytometry．ResultsACRhadtoxiceffectonNB．1cellswithIC500f69．8g／ml(48h)．AppropriatedoserangesofBDNF(50—75ng／m1)hadprot

8、ectiveeffectsOilNB一