复合成骨诱导剂促进大鼠骨髓基质干细胞向成骨细胞分化的实验研究

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1、泸州医学院硕士毕业论文目录摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯7日U舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．7材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯121．实验材料与仪器⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．121．1．实验动物⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯121．2主要实验药品试剂⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯121．3主要试剂的配置⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯142实验方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯15

2、2．IBMSCs的采集，分离及培养⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯152．2大鼠BMSCs的表型鉴定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．172．3大鼠骨髓基质干细胞的生长曲线绘制⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯182．4大鼠骨髓基质干细胞的成骨诱导⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯182．5Western．blot检测BMP．2的表达⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．19结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．261．形态学观察⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．262．大鼠BMSCs的表型鉴定结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．273．大鼠骨髓基质干细胞的生长曲线⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．

3、284．Western．blot检测结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯29讨{仑⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．331．本实验的意义⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．33泸州医学院硕士毕业论文2．骨髓基质干细胞的培养方法及表型鉴定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．333诱导骨髓基质干细胞向成骨细胞转化的方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．354．双膦酸盐的生物学特性及最佳实验浓度⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．365．BMP．2在BMSCs向成骨细胞转化过程中表达的意义⋯⋯⋯．37结j硷⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．40本

4、实验的不足之处⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．41参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯42英汉缩略词对照表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．48致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯49文献综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯50双膦酸盐与颌骨坏死相关关系研究进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯50泸州医学院毕业硕士研究生⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．62学位论文独创性声明及发表承诺书⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．62泸州医学院硕士毕业论文复合成骨诱导剂促进大鼠骨髓基质干细胞向成骨细胞分

5、化的实验研究摘要目的：通过不同浓度的阿仑膦酸钠(Alendronate，ALN)与相同浓度的常规成骨诱导剂(10。8mol／L地塞米松，10．0mmol／LB．甘油酸钠，50mg／L抗坏血酸)作用于大鼠骨髓基质干细胞(BoneMarrowStromalStemCells，BMSCs)，研究ALN是否具有增强常规诱导剂诱导大鼠骨髓基质干细胞向成骨细胞转化的作用，同时研究在何种浓度下增强效应最理想，以此来探讨作为在骨组织工程中的种子细胞来源之一的BMSCs女I何在体外能高效的分化为成骨细胞，并观察其成骨过程中BMP．2的表达，为以后临床修复研究提供基础性准备。方法：取2只2月龄

6、的雄性SD大鼠，将其脱颈处死消毒后在超净工作台内解剖出四肢的股骨、胫骨并获其骨髓，采用密度梯度离心法并结合贴壁培养法分离纯化大鼠BMSCs，制备出BMSCs的单细胞悬液。接种于含10％胎牛血清的L．DMEM培养基中，通过连续传代培养，进一步去除未贴壁的干细胞及其他细胞等，待细胞贴壁达到培养瓶底80％左右时，加入0．25％的胰蛋白酶进行消化传代。取生长良好的第3代对数期细胞，以l×106／L的细胞浓度进行CD44，CD45表型鉴定以确定所得的细胞为骨髓基质干细胞，同时绘制细胞生长曲线图。将己进行鉴定的细胞以1×108／L的细胞浓度分为7个组分别为A．G，A组作为对照组，继续加

7、入含10％FBS的L．DMEM培养基进行培养；B组加泸州医学院硕士毕业论文入含有常规诱导剂的培养基(10-Smol／L地塞米松，10。0mmol／LB．甘油酸钠，50mg／L抗坏血酸)进行培养；C组中加入含常规诱导剂及10击mol／LALN培养基：D、E、F、G组分别在C组的基础上将ALN的浓度分别改为10‘7mol／L、10’8mol／L、10。9mol／L、10‘10mol／L并加入，以上组均持续培养，每2．3天更换一次培养液，同时在倒置显微镜下观察细胞的增殖及形态变化，培养1、2、3周后分别用western．