黄芩苷对肝癌细胞cx26及cx43表达的影响

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1、河北医科大学硕士学位论文黄芩苷对肝癌细胞Cx26及Cx43表达的影响姓名：王娜申请学位级别：硕士专业：内科学指导教师：郭昱201203中文摘要黄芩苷对肝癌细胞Cx26及Cx43表达的影响摘要目的：原发性肝癌(Hepatocellularc鲫cmoma，HCC)是恶性肿瘤之一严重威胁着人类的生命，90％的肝癌是原发性肝癌，每年全世界有多于25万的原发性肝癌的新发病例。我国每年死于肝癌约11万人。临床上治疗肝癌的有效手段包括手术切除和肝动脉栓塞化疗，但由于早期病变不容易被发现，大多数患者在就诊时病情已发展到中晚期，此时多数病人的肝功能和体质状况较差，已经难以耐受上述治疗方法，而

2、且术后复发率高，加之对放疗也不敏感，给肝癌的治疗带来一定的困难。针对肝癌的复杂的特性我们可以改变传统的治疗模式来提高治疗效果。许多有效的抗癌药物已从植物资源中发掘出来。草本药物术后长期治疗可以防止癌症的复发和转移，既可以减轻放化疗的副作用，又可以加强放化疗的效果。对于晚期癌症患者或不能手术或放化疗的又可以单独应用中药治疗来延长生存时间、改善生存质量、控制病情的发展有着重要的意义。生物体内，细胞与细胞间有两种不同的通讯方式。一种是不需要直接与细胞接触，有生长因子或激素介导。一种是细胞接触介导的通讯。后一种即细胞间隙连接通讯(gapjunctionintercellularco

3、mmunication，GJIC)是有细胞间缝隙连接(Gapjunction，GJ)完成的，有着广泛的生理功能包括调节细胞的生长、细胞的分化和组织的平衡。第二信使分子和小的分子包括c舢岬、cGlVIP、IP3、ca：+等通过缝隙连接进行传递。GJ是有分布于两相邻细胞质膜上的连接子(connexon)构成，每个连接子有六个蛋白亚单位组成，构成这种亚单位的蛋白质称为连接蛋白(connexin，Cx)。癌机制的形成可能与肿瘤细胞和正常细胞之间形成的同源性或异源性的GJIC受到阻碍有关。目前至少有15种不同的Cx从啮齿动物中克隆出来，它们的表达有组织特异性。在肝脏中，GJIC至少包

4、括三种连接蛋白：Cx32(connexin32，Cx32)、Cx26(connexin26，Cx26)和Cx43(connexin43，Cx43)。它们的分布取决于细胞的类型和在肝脏中分布的位置。在体内和体外的培养中，Cx26主要表达于正常的肝细胞，而Cx43表达于肝癌细胞。’中文摘要已有研究显示Cx基因作为候选抑癌基因，其介导的GJIC具有抑制肿瘤发生的作用。肿瘤细胞中连接蛋白基因表达的异常，并不随基因组DNA的丢失或突变，而是表达水平的下调。基于CX有抑制肿瘤生长的功能和在肿瘤中的表达是缺失的，清楚的表明恢复Cx的表达来抑制肿瘤的生长是一个可行的治疗策略。黄芩苷是我国传

5、统中药黄芩中提取的一种成分，属于黄酮类化合物，它具有多种药理作用包括抗炎、抗过敏、抗氧化、保肝、利胆等多种药理作用。已有多篇报道黄芩苷对多种肿瘤有抑制作用如前列腺癌、肺癌、恶性淋巴瘤、骨髓瘤、肝癌等。但其抗肿瘤的作用机制是否和调节Cx表达有关，目前尚无报道。为此本实验通过将黄芩苷作用于肝癌细胞”SMCC．7721，从基因水平和蛋白水平观察黄芩苷对Cx43及Cx26表达的影响。为传统中药的抗癌机制的研究和临床应用提供新的理论和实验依据。方法：l肝癌细胞SMMC．7721的培养：人肝癌细胞株SMMC．7721培养于RPMI．1640培养液，其中包含10％胎牛血清、10099／m

6、l链霉素、100U／ml青霉素，置37。C，5％C02'叵温密闭式孵箱内培养传代。实验分为4组：①空白对照组(只：J112％胎牛血清培养基)②黄芩苷组(10mg／1)⑧黄芩苷组(20rag／1)④黄芩苷组(40rag／1)。2用RT．PCR法检测对照组、黄芩苷各个浓度组Cx26、Cx43基因表达。3用Westernblot法检测对照组、黄芩苷各个浓度组中Cx26蛋白表达。4用免疫细胞化学检测Cx43蛋白表达。结果：l黄芩苷干预肝癌细胞SMMC．772148h后Cx26、Cx43mRNA变化：Cx26mRNA表达水平与对照组比较有明显上调趋势，具有统计学意义(尸

7、各浓度组之间有差异，差异有显著性(尸O．05)。各浓度组之间比较(P>O．05)，差异无统计学意义。2黄芩苷干预肝癌细胞SMMC．772148h后，Cx26蛋白表达量与对照组比较明显上调，差异有显著性(p<0．05)。黄芩苷各浓度组之间比较差异有显著性(P