泡桐花总黄酮抗哮喘豚鼠气道炎症的作用机制探讨

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1、泡桐花总黄酮抗哮喘豚鼠气道炎症的作用机制探讨陈保红，李寅超，赵宜红，傅蔓华【关键词】豚鼠；,,慢性气道变应性炎症；,,泡桐花总黄酮　　摘要：目的通过豚鼠哮喘模型研究泡桐花总黄酮抗哮喘气道变应性炎症的作用。方法以卵蛋白（OA）致敏豚鼠为动物模型，灌胃途径予以泡桐花总黄酮大、小剂量，观察各组豚鼠支气管肺泡灌洗液（BALF）中白细胞总数、嗜酸性粒细胞（EOS）数和嗜酸性粒细胞特异性趋化因子（Eotaxin）的改变。结果泡桐花总黄酮可显著延长致敏豚鼠的引喘潜伏期，不同程度地抑制BALF中的EOS和白细胞总数及气道上皮Eotaxin的过度表达。结论泡桐花总黄酮对哮喘具有一定的保护作用，其中泡桐花总

2、黄酮可能通过调控Eotaxin在气道黏膜上皮的过度表达，进而抑制Eos向哮喘气道的募集，消除气道炎症，成为其发挥抗过敏性哮喘的重要环节。　　关键词：豚鼠；慢性气道变应性炎症；泡桐花总黄酮　　Abstract：ObjectiveThisstudyaticmodel,inducedbyOVAinisteredbyintragastricgavage(ig)berofacidophilsandtheEotaxininbronchoalveolarlavagefluid(BALF)mationsignificantly.Thenumberofacidophilsandtotal.Conclusi

3、onTheresultssuggestthatflavonoidsinFructusPaulomationbyinhibitingtheoverexpressionoftheEotaxinintracheaepithelium.　　Keysl.)Hemsl;Flavonoids;Bronchiaasthma　　气道炎症是支气管哮喘(asthma)的病理基础，有多种炎症细胞、炎症介质和细胞因子参与其炎症过程〔1〕。研究发现〔2〕嗜酸性粒细胞（EOS）趋化聚集，在气道炎症的形成过程中起重要作用，Eotaxin是EOS的选择性趋化剂〔3〕，也是EOS在哮喘发病过程中选择性增加的原因。因此，调控

4、Eotaxin的过度表达，抑制EOS在气道内的募集，消除气道炎症，对治疗哮喘具有关键性意义。根据文献报道〔4，5〕，少常用草药泡桐花在支气管哮喘的临床治疗上具有一定的效果；泡桐花浸膏能够明显改善哮喘豚鼠肺组织的病理损伤，对哮喘豚鼠有显著的治疗作用；泡桐花主要成分〔6〕为挥发油、总黄酮、熊果酸等，其中总黄酮含量较丰富（3.081%）。我们以泡桐花总黄酮为研究对象，采用ig给药途径，结合图象分析技术探讨其抗哮喘作用及其机制。　　1材料与方法　　1.1动物与分组健康白化豚鼠，雌雄各半，体重（200±50）g，由河南省实验动物中心提供。随机分为模型、阳性、空白对照组和泡桐花总黄酮大、小剂量组。1

5、0只/组。　　1.2药品与试剂卵白蛋白（ovalbumin，OA）：Sigma公司，GradeⅢ；Eotaxin一抗(BA1469，Rabbitanti-Eotaxin)武汉博士德生物工程有限公司，相应二抗试剂盒及阳性对照片购自北京中山生物技术有限公司；醋酸地塞米松片，浙江仙琚制药股份有限公司，批号051247。泡桐花总黄酮由郑州大学药学院生药学研究室提供。　　1.3动物诱喘及用药参照宫兆华〔7〕方法，常规饲养观察3d无异常后，予10％OA生理盐水(N.S)溶液200mg/kgip致敏，并于当天开始按表1剂量给药。第15天时，予5%OA的N.S溶液雾化吸入诱导哮喘发作。用哮喘发作（动物取

6、出后的表现为咳嗽、呼吸困难、烦躁、抽搐、跌倒甚至死亡)的动物进行实验。　　1.4用药过程中哮喘防治作用观察用药第5，12天及第15天，3次对豚鼠进行激发实验。予5%OA的N.S溶液雾化吸入激发10s，封闭时间共20s，观察记录各组动物哮喘严重程度，取第15天的引喘潜伏期（自雾化开始至豚鼠腹肌痉挛、腹部凹陷出现的时间作为引喘潜伏期，超过6min者以360s计算）为统计指标。在第5，12天的激发过程中，先后有8只动物（大、小剂量组各2只，模型组3只，阳性组1只）因反应剧烈，抢救不及而窒息死亡。　　1.5BALF（bronchoalveolarlavagfluidBALF）的采集与细胞计数暴露

7、豚鼠气管肺，用丝线结扎右肺门处，行气管插管灌洗左肺。灌入N.S5ml（抽吸2次）×2次，灌洗回收率大于80%，无菌离心（1500r/min×10min），沉淀细胞以Hanks液处理后即刻在显微镜下计数细胞总数，细胞浓度调至2×106/ml，涂片，瑞氏染色，计数白细胞总数和EOS数。　　1.6免疫组化Eotaxin检测摘取右肺中叶，放入乙醇、醋酸和甲醛混合固定液中固定48h。石蜡切片（4μm×3张）脱蜡至水，行免疫组化Eotaxin（