微生物中细菌菌落总数

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1、种测定化妆品菌落总数培养基的质量比较录入时间:2010-9-1415:11:13来源：现代预防医学随着化妆品使用越来越广泛。已成为人们日常生活中的必需品。开展化妆品卫生质量监测。是保障人民健康维护消费者的利益，如使用了细菌总数超标的化妆品。会导致皮肤感染。因此，化妆品细菌总数测定是便于判明样品被污染的程度。是对样品进行卫生学评价的重要依据。按国家卫生部颁布《化妆品卫生规范》，卵磷脂、吐温80营养琼脂培养基是用于测定化妆品菌落总数的培养基。现在生产培养基的厂家很多，为了解不同厂家生产的卵磷脂、吐温80营养琼脂培养基质量，对4种培养基进

2、行比较。现将结果报告如下。 1材料与方法1.1实验菌株大肠埃希菌(ATCC 25922)，金黄色葡萄球菌(ATCC6538)。 1.2培养基卵磷脂、吐温80营养琼脂培养基分别购自杭州天和微生物试剂有限公司．北京陆桥技术有限责任公司．广东环凯微生物科技有限公司等3种干燥培养基，编号为1、2、3号，干燥培养基按产品说明书配制，均在有效期内使用。自配卵磷脂、吐温80营养琼脂培养基，由本实验室参照文献方法配制。其蛋白胨采用日本进口材料，自配培养基编号为4号，共4种卵磷脂、吐温80营养琼脂培养基。 1.3试剂0.5％氯化三苯四氮唑(TTC)1

3、21℃20min高压灭菌，备用。 1.4实验方法1.4.1菌液的准备取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌分别接种营养肉汤管。在37℃培养18～24h。 1.4.2稀释培养基并接种将培养好的大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌两种肉汤管用生理盐水10倍稀释，从10-1到l0-7。选用平板上菌落数在50～100cfu之间的稀释度，然后取稀释好菌悬液1ml置入无菌平皿，倾注加入0.5％TTC的卵磷脂、吐温80营养琼脂，每个平板15-20ml，每种培养基接种3个平板。待凝固后将平板翻转置37℃培养48h取出观察结果．并以每种培养基的3个平板菌落平均数为各检测

4、数进行比较，试验重复5次。 1.4.3实验室室内质量控制 用菌落计数方法，取大肠埃希菌肉汤培养管用生理盐水10倍稀释，从10-1到10-7，吸取10菌悬液1ml注入无菌平板。共接种3个平板，然后将已溶解的营养琼脂倾注平板。混匀，待凝固置37℃培养48h后作菌落计数，连续进行10次。将所得结果标入质量控制图。 2  结果2.1 4种培养基大肠埃希菌的计数比较4种培养基对大肠埃希菌进行5次菌落计数重复试验，结果显示各种培养基的菌落大小与数量基本一致．差异无统计学意义(F=0.257，P>0.05)。见表1。 表1   4种培养基大肠埃希

5、菌生长菌落数比较培养基编号细菌计数（×106cfu/ml）1234518.756.006.908.266.1029.736.408.438.966.2339.266.567.168.706.104(自配)9.6606.167.208.806.96  2.2  4种培养基对金黄色葡萄球菌细菌总数计数连续进行5次实验，结果显示各种培养基的菌落大小与数量基本一致，差异无统计学意义(F=0.066，P>0.05)：见表2。 表2  4种培养基金黄色葡萄球菌生长菌落数比较培养基编号细菌计数（×106cfu/ml）1234516.568.436

6、.609.036.2326.908.766.169.166.537.239.805.668.806.534(自配)8.639.065.869.136.202.3实验室室内质量控制连续10次菌落计数，测定值在4.3×106—9.66×106之间，平均值为6.94×106cfu／ml。s=1.74×106cfu／ml。10次测定值均在`x±2s范围内，达到实验室内部控制标准要求。 3  讨论实验表明，在4种不同厂家生产的卵磷脂、吐温80营养琼脂培养基上，大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌的生长速度、菌落形态与数量无明显差别，各种培养基的软硬度、

7、pH值等理化指标符合质量要求，差异无统计学意义。但在透明度上自配的卵磷脂、吐温80营养琼脂培养基较其他3种干燥培养基清晰透明，而3种干燥培养基配制的平板较混浊可能是由于培养基的原材料不同的关系。自配培养基用的是日本进口蛋白胨，其颜色偏浅。蛋白胨是由蛋白质(如酪蛋白、纤维蛋白)经酶或酸碱分解而成。由于蛋白质的来源和消化程度不同，因而制得的胨质量相差很大，就是同一厂家不同批号的蛋白胨质量也会有差异，所以是否这样配制出来的培养基的透明度就有所不同。实验室室内质量控制是保证实验室检验结果准确性的必要基础。为确保本次实验结果的准确性与可靠性，

8、我们对实验结果进行控制，绘制质量控制图，结果显示，l0次菌落总数测定值在4.3×106—9.66×106之间，均在允许误差范围，实验结果在`x±2s之内，未发现失控现象，从实验稳定、重复性好，表明本次培养基的实验结果是可信的。 近年，