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《h9n2禽流感病毒ha2基因重组杆状病毒的表达》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、H9N2禽流感病毒HA2基因重组杆状病毒的表达中国兽医科学2006,36(O5):362—365VeterinaryScienceinChina中图分类号:S852.659.5:Q786文献标识码:A文章编号:1673—4696(2006)05—0362—04H9N2禽流感病毒HA2基因重组杆状病毒的表达王彬,唐志芬,齐岩,孙凌霜,王君伟(东北农业大学动物医学院,黑龙江哈尔滨150030)摘要:从pMD18一THA阳性质粒扩增了H9N2亚型禽流感病毒的HA2基因,将扩增到的HA2基因克隆至昆虫杆
2、状病毒转移栽体pBlueBacHis2A中.将其与杆状病毒共转染于Sf9昆虫细胞,经蚀斑筛选纯化重组杆状病毒,用其感染Sf9昆虫细胞,并优化表达条件.sDS-PAGE和Westernblotting分析表明,表达产物的分子质量约为27ku.DotELlSA分析表明,表达的HA2融合蛋白可与鸡抗H9N2亚型血清发生特异性反应,而与H5和H7亚型抗血清间无交叉反应.关键词:禽流感病毒;H9N2亚型;HA2基因;重组杆状病毒;抗原性RecombinantbaculovirusexpressionofH
3、A2geneofavianinfluenzavirusH9N2subtypeWANGBin,TANGZhi—fen,QIYan,SUNIingshuang,WANGJun—wei(CollegeofVeterinaryMedicine,NortheastAgriculturalUniversity,Harbin150030,China)Abstract:UsingapairofspecificprimersdesignedaccordingtothepMD18THA,theHA2geneofav
4、ianinfluenzavirusH9N2subtypewasamplifiedbyPCR.ThePCRproductwasclonedintopBlueBa—ellis2AtoobtainaneukaryoticrecombinantplasmidpBlueBacHis2A—HA2,andthenSf9cellsweretrans—fectedwiththerecombinantplasmid.Afterplaquescreening,thetargetHA2genewasexpressedi
5、ninsectcellSf9,andtheexpressedproteinwas27kuinmolecularweight.Western-blottingandDot～ELISAanaly—sisshowedthattherecombinantproteinhadgoodreactivityagainstH9N2subtypeserumanddidnothaveanycrossreactionwithchickenH5andH7antiserum.Keywords:avianinfluenza
6、virus;H9N2subtype;HA2gene;recombinantbaculovirus;antigenicity禽流感(avianinfluenza,AI)是由正黏病毒科,流感病毒属A型流感病毒(avianinfluenzaVirUS,.AIV)中任何一种血清亚型毒株引起的各种家禽及野生禽类感染和/或发生疫病综合征的传染性疾病l】.它已被世界动物卫生组织定为A类传染病,并列入国际生物武器公约动物类传染病名单].根据AIV对禽类致病性的差异,可将其分为高致病性禽流感病毒(HPAIV)和低
7、致病性禽流感病毒(LPAIV).在LPAIV中H9亚型AIV是存在最广泛且最具危害性的一种,从1966年至今,该亚型病毒已先后从世界各地的禽,猪和人体内分离到,给养禽业和人类健康造成了严重危害].血凝素(HA)是参与AIV感染的主要蛋白,HA合成后切除信号肽并被切割为HA1和HA2两条独立的肽链,并具备相对独立的空间结构,彼此间由二硫键连接,才可在感染中发挥作用].本研究依据HA2结构的独立性和HA2基因在H9亚型间的高度保守性,将HA2基因与杆状病毒进行重组与表达,并对其表达产物的抗原性进行了
8、分析.l材料与方法1.1菌种,细胞,载体及抗体pMD18一T—HA阳性质粒],感受态菌种TG1,昆虫细胞Sf9均由笔者所在实验室保存.鸡H9,H5,H7亚型抗血清由中国农业科学院哈尔滨兽医研究所惠赠.BACN—BIUELINEARTRANS一收稿日期:2006—0119;修回日期:2006—03—23作者简介:王彬(1978一),男,山东汶上人,硕士生,Email:hashidewb@yahoo.corn.cn.王君伟为通讯作者,Tel:0451—55190385,E—mail:jwwang@n
