酚-氯仿法从全血中分离dna步骤

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1、酚-氯仿法从全血中分离DNA一、所需溶液：1PBS缓冲液NaCl8gKCl0.2gNa2HPO41.44gKH2PO40.24g加超纯水定容至1000mL，调pH至7.4，高压灭菌，4℃保存。2DNA抽提液Tris(pH8.0)/MW121.140.6057g10mmol/LEDTA/MW372.2418.612g0.1mol/LSDS/MW288.382.5g0.5%加超纯水定容至500mL，调pH至8.0，高压灭菌，4℃保存。使用前放至37℃水浴中，使之完全溶解。3蛋白酶K20mg/mL−20℃保存4Tris饱和苯酚5氯仿6无水乙醇用前−20℃保存770%乙醇8TE缓冲液Tr

2、is/MW121.140.6057g10mmol/LEDTA/MW372.240.1861g1mmol/L加超纯水定容至500mL，调pH至8.0，高压灭菌，4℃保存。二、所需主要仪器设备制冰机，冰箱，冷冻低温超速离心机，移液器，恒温水浴箱三、操作步骤1、冰冻的血样在室温水浴中融化；2、将1mL全血转入一个无菌的2mL离心管中；3、加入等体积（1mL）的PBS缓冲液，温和摇动15min；4、室温3500g离心10min；5、用移液器弃上清，重复步骤3、4至上清液透明，沉淀无色；6、离心管中加DNA提取液1mL，温和摇动使细胞沉淀悬浮；7、37℃水浴1h；8、加入蛋白酶K3μL（终

3、浓度为60μg/mL），混匀；9、在恒温水浴箱中55℃温育过夜（16h左右），至细胞沉淀物被完全消化，溶液澄清；10、反应液冷却至室温，加入1倍体积（1mL）的Tris饱和酚，放置冰上温和摇动20min；11、4℃，12000g离心10min；12、将上层水相用移液器移到另一灭菌离心管中；13、加入0.5倍体积（0.5mL）的酚和0.5倍体积（0.5mL）的氯仿，放置冰上温和摇动20min；14、4℃，12000g离心10min；15、将上层水相用移液器移到另一灭菌离心管中；16、加入1倍体积（1mL）的氯仿，放置冰上温和摇动20min；17、4℃，12000g离心10min；1

4、8、将上层水相用移液器移到另一灭菌离心管中；19、加入2倍体积的预冷无水乙醇（−20℃），轻轻口底摇晃多次至DNA析出，然后−20℃放置30min；20、用玻璃钩将DNA团钩出转入一新的灭菌离心管中，或4℃，12000g离心10min，弃去乙醇；21、加入70%乙醇1mL，温和摇动10min；22、4℃，12000g离心10min，弃乙醇，重复漂洗一次；23、真空干燥或室温下使乙醇挥发干净；24、根据DNA的量，加入超纯水100-300μL，4℃保存至DNA完全溶解，分光光度计测定浓度后，-80℃保存。从组织样品中分离DNA一、所需溶液：1SE缓冲液NaCl/58.440.730

5、5g25mmol/LEDTA/MW372.2413.959g75mmol/LSDS/MW288.385g1%加超纯水定容至500mL，调pH至8.0，高压灭菌，4℃保存。2蛋白酶K20mg/mL−20℃保存36mol/LNaCl使用前65℃预热4氯仿5无水乙醇用前−20℃保存670%乙醇7TE缓冲液Tris/MW121.140.6057g10mmol/LEDTA/MW372.240.1861g1mmol/L加超纯水定容至500mL，调pH至8.0，高压灭菌，4℃保存。二、所需主要仪器设备制冰机，冰箱，冷冻低温超速离心机，移液器，恒温水浴箱三、操作步骤1、称取10mg的组织样品放入

6、1.5mL离心管中；2、用一个合适的干净玻棒或塑料棒沿离心管壁挤碎组织；3、加入500μLSE缓冲液；4、每个样品加入5μL的蛋白酶K（20mg/mL）；5、样品在65℃水浴恒温箱中放置12-16h；6、取出样品加入180μL65℃预热的6mol/LNaCl，充分混合（口底摇动15次）；7、样品放置冰上，加入700μL的氯仿，温和摇动20min；8、4℃，12000g离心10min；9、将上层水相用移液器移到另一灭菌离心管中；10、重复步骤7、8、9一次；11、加入2倍体积的预冷无水乙醇（−20℃），轻轻口底摇晃多次至DNA析出，然后−20℃放置30min；12、用玻璃钩将DNA

7、团钩出转入一新的灭菌离心管中，或4℃，12000g离心10min，弃去乙醇；13、加入70%乙醇1mL，温和摇动10min；14、4℃，12000g离心10min，弃乙醇，重复漂洗一次；15、真空干燥或室温下使乙醇挥发干净；16、根据DNA的量，加入超纯水100-300μL，4℃保存至DNA完全溶解，分光光度计测定浓度后，-80℃保存。