菠菜叶中dna的提取

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1、中央民族大学生命与环境科学学院化学综合性设计实验报告菠菜叶中DNA的提取ExtractDNAfromtheleafofspinach姓名：学号：年级：专业：小组成员：指导教师：年月日菠菜叶中DNA的提取马鹏举（中央民族大学北京100081）摘要：采用CTAB方法从菠菜叶片中提取DNA,通过琼脂糖凝胶电泳对所提取的DNA进行定性分析和综合比较。研究提取缓冲液用量、水浴时间、蛋白质沉淀剂(氯仿-异戊醇)用量、DNA沉淀剂(异丙醇)用量等条件对DNA提取效率和纯度的影响。关键词：菠菜叶基因组DNA提取DNA检测提取方法琼脂糖凝胶电泳法ExtractDNAfrom

2、theleafofspinachMAPeng-juMinzuunivercityofChina，Beijing，100081Abstract：UsingCTABmethodtoextractDNAfromspinachleaves,throughagarosegelelectrophoresisofDNAextractedbythequalitativeanalysisandcomprehensivecomparison.Studyextractionbufferconsumption,waterbathtime,proteinprecipitator(c

3、hloroform,isoamylalcohol)dosage,DNAprecipitationagent(isopropylalcohol),suchasthedosageofDNAextractionefficiencyandtheinfluenceofpurityKeywords:SpinachleavesGenomicDNAextractionDNAtestingExtractionmethodAgarosegelelectrophoresis前言制备基因组DNA是进行基因结构和功能研究的重要步骤，通常要求得到的片段的长度不小于100-200kb。

4、在DNA提取过程中为尽量避免使DNA断裂和降解的各种因素，以保证DNA的完整性，主要采用CTAB方法，其他的方法还有物理方式:玻璃珠法,超声波法,研磨法,冻融法；化学方式：异硫氰酸胍法,碱裂解法；生物方式:酶法。根据核酸分离纯化方式的不同有:硅质材料、阴离子交换树脂等。CTAB是一种阳离子去污剂,具有从低离子强度溶液中沉淀核酸与酸性多聚糖的特性。在高离子强度的溶液中(>0.7mol/LNaCl),CTAB与蛋白质和多聚糖形成复合物，只是不能沉淀核酸.通过有机溶剂抽提，去除蛋白、多糖、酚类等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来。1.1仪器微量移液器、台式高速

5、离心机（20000r/min）、高压灭菌锅、常用玻璃仪器及滴管、10ml离心管、研钵、凝胶成像分析系统、琼脂糖凝胶电泳系统1.2材料菠菜叶1.3试剂[1]CTAB溶液（CTAB—20g/L，NaCl—1.4mol/L，EDTA—10mmol/L，Tris—100mmol/L，pH8.0）TE缓冲液（EDTA——1mmol/L，Tris——10mmol/L，pH8.0）氯仿，异戊醇，巯基乙醇，苯酚，异丙醇，液氮，无水乙醇1.4方法[2]（1）将CTAB分离缓冲和巯基乙醇液置于65℃水浴中预热；（2）称取菠菜叶1g，置于的研钵中，倒入液氮，尽快研碎，在液氮挥发

6、完后停止研磨；（3）取适量粉末加入10ml的EP管中，加入1ml预热的CTAB分离缓冲液中，轻轻晃动使之混匀；（4）样品于65℃水浴中保温40分钟，并在保温过程中不断摇晃；（5）冷却2min后，加入1ml的酚-氯仿-异戊醇（25：24：1），充分震荡，使两者混合均匀，4℃12000r/min离心10min；（蛋白质溶解在酚中，DNA溶解在水相中，氯仿和异戊醇有加速分层，有助于分离，）（6）取上清液至10mL的离心管中，加入2ml的氯仿-异戊醇（24：1），轻轻颠倒离心管，混匀，4℃12000r/min离心10min；（7）小心取上清液置于一个新的10mlE

7、P管中（尽量避免吸取中间层）,加入2.5ml的异丙醇（-20℃预冷），将离心管慢慢上下摇动30s，使异丙醇与水层充分混合室温放置15min至能见到DNA絮状物；（沉淀DNA）（8）10000r/min离心10分钟,小心倒去上清液；（9）用400ul无水乙醇洗涤DNA沉淀直至无色，4℃10000r/min离心10分钟；（洗涤DNA出去分离过程中残留有机溶剂和离子）（10）倾去上清液向下层离心物中加入100μLTE缓冲液进行溶解；（11）在室温下使DNA沉淀干燥；（12）取DNA溶液做0.8%的琼脂糖电泳；（13）称取0.4g电泳用凝胶糖，放至三角烧瓶中，加入

8、50mL0.5*TBE缓冲液，混匀后，将烧瓶放入微波炉中加热，看琼