肌酸激酶mm亚型测定及其临床意义

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1、肌酸激酶MM亚型测定及其临床意义肌酸激酶MM亚型测定及其临床意义肌酸激酶MM亚型测定及其临床意义肌酸激酶MM亚型测定及其临床意义肌酸激酶MM亚型测定及其临床意义肌酸激酶MM亚型测定及其临床意义肌酸激酶MM亚型测定及其临床意义肌酸激酶MM亚型测定及其临床意义肌酸激酶MM亚型测定及其临床意义肌酸激酶MM亚型测定及其临床意义上海医学检验杂志1992年第7卷第1期卜}1f1,两;/L-.函符,臻,盈肌酸激酶MM亚型测定及其临床意义上海长征医院心内科(2o0003)黄高忠综述陈思聪许绍辉*审校R,』/.——————

2、一●,肌酸激酶(CK)及其同工酶CK—MB是目前公认的诊断急性心肌梗塞(AMI)最有价值的生化指标,具有很高的敏感性和特异性n.近十余年来,CK—MM亚型的研究逐渐受到重视,观察AMI后发现该亚型的演变可早期诊断AMI,推测梗塞时间及判断再灌注,对于AMI溶栓治疗病例的选择,疗效和顶后的判断具有独特的价值,已成为近年来国外酶学研究的热点之一.现简要介绍如下.一,命名及理化特性1968年Kumuduvalli发现从人类肌肉中提取的CKMM可通过电泳区分为三个不同的区带,但未引起重视.七十年代末,Wevei.

3、s[.,3通过杂交试验证实l『CK—MM是山两个不完全相同的亚单位构成的二聚体,其不同的组合形成一j’CK—MM的三种亚型.目前命名方法尚未统一.一般根据其电泳迁移率的差异,从阳极到阴极命名为CK—MM,CK—MM,CK—MM3(有的以C,B,A分别代替1,2,3).其亚基组成分别为:CK—MM3一M2M2;CK—MM2一MlM2;CK—MMl—M】M1.现已证实,人心肌和骨骼肌中fl,~CK—MM均以CK—MM3的形式存在,又称为组织型或纯基因型CK—MM.AMI后CK—MM3随同其他生物大分子如肌球蛋

4、白,谷草转氨酶等一起从坏死细胞内逸出,经淋巴回流入血,在血中羧肽酶N(CP—N)的作用下,其中一个M亚基肽链羧基末端上的赖氨酸被切除转变成CK—MM.;随后另一个M亚基又经历同样变化,转变成CK—MM,(可见M.和MI亚基仅相差一个赖氨酸).这三种亚型具有相同的抗原性,分子量和酶活力,8].因在生理pH下赖氨酸带正电,故其等电点不同.Hashimoto应用聚焦层析法测定的等电点CK—MM3,CK—MM2CK—MM1分别为7.91,7.74~N7.51.CK—MM1的等电点最低,故其向阳极的迁移率最大.CP

5、-N存在于E常血t…HJ-f1,分了量19万,不能透过毛绷血管内皮,来见于肌肉组织或淋巴系统中I”,.&弧j_r,-蔓只订CK放入In1.才龙,f:,j:且由于该反应单向进行,CK—MM不断地从血巾被清除,CK—MM亚型随AMI病程呈现规律性变化一12].CP—N可被特异性抑制剂如苯甲酰精氨酸或e一氨基已酸所抑制.其昕介导的反应依赖于温度,时间和Ca”,在4.G这一转变几乎停止….EGTA或EDTA作为Ca”的螯合剂常用于体外防止采血后亚型的转变.二,检测方法(一)等电聚焦(IEF)法:早期研究者

6、采用本法较多.灵敏度高,CK总活力(T—CK)大于1o～5olU/L即可检出Ell,13,但需用一种昂贵的二性电解质,而且长时间的高压常导致酶的热失活.本法常出现四,五条(分别命名为X和Y带)以上的区带.Guslits[14分离出21条区带,并按概率推论M亚基具有六种不同的结构,但尚无直接证据.Morelli[3观察到这些区带均具有CK潘力,但性质不明;另一种观点则认为是二性电解质与CK—MM相互作用形成的矫作物.(二)聚焦层析(CF)法睛,l6:不使用电流,故不致使酶蛋白变性失活,灵敏度也较高,但试剂昂

7、贵.(三)免疫浸渍法:方法非常复杂,但可同时分析多个样本,能准确定量,可作为开发其1也方法时的参照.(四)高效液相层析(HPLC)法:3omin内即可得出结果,但需特殊仪器,试剂消耗量大.以上四种检测方法因费时不适于急诊需要,或因成本高不易推广,均难以成为临床普遍使用的方法.(五)电泳法:本法在一股区带电泳基础上增加电泳时间或提高电压,在电泳槽巾加入一种具有类似等电聚焦作用昀特殊缓冲液(Polybuffer96)或加入n_5啡啉丙磺酸形成一种不连续缓冲体系.该法所需设备简单,操作方便,价廉,比较适合国内一

8、般实验室开展n..∞.缺点是灵敏度和准确性嫌不够高,检测时间稍长(2h左右).国外采用高压电泳,可将分离时问缩5～12min,仪器贵m实验诊断科?44?(六)单克隆抗体法:近一,二年外已研制出CK—MM亚型特异的单克隆抗体∞.应用免疫抑制或免疫沉淀0方法测定,不需分离CK—MM亚型,结果准确,仪器设备要求不高,操作简便,随时可急诊检测,目前正在临床试用,有希望普遍推广...三,临床意义(一)早期诊断AMI:AMI的溶栓疗法是近