模型制作论文数学模型论文

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1、模型制作论文数学模型论文脊髓继发性损伤的动物模型制作【摘要】目的急性脊髓损伤后大鼠脊髓横断面神经原的变化。方法用组织化学和图象分析方法观察大鼠脊髓细胞的变化。结果大鼠脊髓神经原细胞免疫反应发生变化(P<0.01)。结论尼氏染色及电镜观察说明继发性脊髓损伤大鼠模型制备成功。　　【关键词】继性损伤；脊髓；大鼠　　急性脊髓损伤后开始时常为不完全性，最后结果常为两种损害机制引起：原发性脊髓损伤和继发性脊髓损伤(SSCI)。脊髓组织遭受机械外力损伤后瞬间引起的组织损害称为原发性损伤，原发性损伤包括机械压迫、出血、电解

2、质从受损细胞中外溢等是在受伤时由外力产生的决定性的、不可逆的损伤，无法针对其损伤机制进行有效的治疗。继发性脊髓损伤为伤后几小时至几天发生的一系列损伤激活的自身破坏过程，使最初病灶周围原来完整的组织发生自身破坏性病变，周围神经功能损害逐渐发展。所产生的脊髓损害远远超过了原发性损伤［1］。　　1资料与方法　　1.1实验材料雄性Wistar大鼠中国医科大学动物室提供。　　1.2实验动物分组本实验选用雄性健康Wistar大鼠40只，体重260~300g，随机分成二组。正常对照组：20只。实验组：20只。　　1.3实

3、验方法　　1.3.1继发性脊髓损伤大鼠模型制备1%戊巴比妥钠腹腔麻醉动物(30mg/kg)，俯卧位固定于立体定位仪上。以T10为中心暴露上下位锥板，咬除锥板，保持硬脊膜完整。在T10阶段节段脊髓表面垫一曲度与脊髓表面一致的3mm×8mm塑料片，用30g重物垂直压迫T10节段脊髓10min，逐层缝合肌肉皮肤。符合以下条件的大鼠归入损伤组：压迫时身体痉挛性颤动、尾巴痉挛性摆动、双下肢及躯体回缩样扑动；压迫后硬脊膜内充血或水肿，双下肢呈迟缓性瘫痪，斜板实验测定最大角度小于30度。对照组大鼠只暴露脊髓。术后不

4、同时间点处死动物，4％多聚甲醛灌注固定，无菌条件下取损伤节段脊髓组织约1.0cm，液氮保存或石蜡包埋。观察期间大鼠如有死亡即时补足。　　1.3.2组化标本制备对实验动物用1％戊巴比妥钠(40ml/kg)腹腔麻醉后开胸，经左心室70滴/min滴入1％肝素钠的生理盐水500ml，同时剪开右心耳。继用0.1M磷酸盐缓冲液(PBS,pH=7.4)配制的固定液(含4％多聚甲醛)灌流固定。取出实验动物的脊髓组织，放入含4％多聚甲醛PBS的固定液中进行后固定大约2h，之后将实验动物的脊髓组织切成薄片移入含20％蔗糖的PB

5、S中。在4℃冰箱中存放，至组织薄片沉底，经水包埋，恒冷箱连续横切片，片厚20μm。经OCT包埋，恒冷箱连续切片，片厚16μm，70℃保存备用。　　1.3.3尼氏染色　　冰冻切片吹干，经PBS漂洗5min×3次，将切片置入1%甲苯胺蓝溶液中37℃孵育90min，取出后用蒸馏水冲洗，PBS漂洗5min×3次，梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片，光镜下观察。　　1.3.4透射电镜技术　　各组动物在1%戊巴比妥钠(40mg/kg体重)腹腔麻醉下，用含1%肝素钠生理盐水200ml快速冲洗后，用2%多聚甲醛及2.5

6、%戊二醛的0.1M磷酸缓冲液250ml灌流固定，灌流后立即取脊髓，组织块置于4℃，2.5%戊二醛中固定24h，经1%锇酸固定1h后，常规脱水，Epon812包埋，L.K.B超薄切片，醋酸铀、柠檬酸铅双重染色，日立H600透射电镜观察并拍片。　　2结果　　2.1尼氏染色结果及电镜结果　　正常对照组大鼠脊髓细胞的尼氏染色切片上，神经元数量较多，排列紧密，形态完整，泡浆有内尼氏体。　　实验组大鼠脊髓，肉眼可见大鼠脊髓损伤局部组织充血。镜下可见SCCI后3~6h损伤局部神经元核固缩，胞体缩小，胞质深伊红染色，成为红

7、色是神经元。伤后1~3d，轴突肿胀，出现空泡，白质内神经髓鞘散乱、崩解破裂。伤后3~7d胶质细胞增生明显，可见卫星现象及鬼影细胞。伤后14d，损伤段脊髓变细部分灰质崩解坏死，可见囊腔形成。正常神经元数量明显增多，细胞丰满，泡浆内尼氏体丰富。　　根据尼氏染色及电镜观察说明继发性脊髓损伤大鼠模型制备成功。　　3讨论　　神经损伤的继发性损害因素是一种细胞和分子水平的主动调节过程，其演变过程达数小时之久，具有可逆性且可被控制。继发性脊髓损伤是指由于脊髓血流量少，缺乏侧枝循环，对缺氧耐受性差，一旦损伤，局部血管痉挛，

8、脊髓的血液动力学、生物化学、物质代谢及能量代谢均发生变化，并相互影响，形成恶性循环，病理上表现为脊髓缺血、缺氧、水肿，继而液化、坏死等改变。　　研究表明，脊髓的缺血缺氧几乎在伤后立即出现［2］。损伤后微循环变化所致的脊髓缺血缺氧是继发损害的关键机制。脊髓血流量的减少与组织受损的严重程度呈线性相关。目前认为造成脊髓继发性缺血缺氧损害的原因有以下几种［3］：①损伤区缺乏侧支循环；②微血肿压迫周围组织和微血管；③微血栓