HPLC-ELSD测定补益蒺藜片中黄芪甲苷的含量.doc

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1、HPLC-ELSD测定补益蒺藜片中黄芪甲苷的含量作者：杨庆胜，李彩荣，赵雪晖摘要:目的:建立补益蒺藜片中黄芪甲苷的含量测定方法。方法:采用高效液相―蒸发光散射检测法（HPLC-ELSD），对补益蒺藜片中黄芪甲苷进行含量测定。色谱柱为ODS-C18色谱柱（250mm×4.6mm，20μm）;流动相:乙腈―水（1∶2）;进样量10μL;室温;流速1.0mL/min;ELSD参数:漂移管温度100℃，气体流速2.74mL/min。结果:黄芪甲苷对照品在2.024～10.120μg范围内，进样量与峰面积间呈良好的线性关系，r=0.9996，平均回收率为99.26%。结

2、论:本方法操作简便，结果准确，重现性好，可用于控制该制剂的质量。关键词:补益蒺藜片;黄芪甲苷;高效液相―蒸发光散射检测法;含量测定补益蒺藜片系部颁标准补益蒺藜丸剂改品种，是由黄芪（蜜炙）、白术（麸炒）、山药、茯苓、白扁豆、芡实（麸炒）、当归、沙苑子、菟丝子、陈皮等十味中药经现代工艺加工制成的薄膜衣片，具有健脾补肾、益气明目之功能，用于脾肾不足、眼目昏花、视物不清、腰酸气短等症〔1〕。黄芪是该处方中的君药，因此，黄芪甲苷是补益蒺藜片的活性成分之一。为了控制补益蒺藜片的质量，保证其疗效，我们采用高效液相―蒸发光散射检测法（HPLC-ELSD）测定了黄芪甲苷在该制剂

3、中的含量，并对其测定方法进行了研究。　　1仪器与试剂仪器:高效液相色谱仪（美国Agilent1100型，Agilent化学工作站提供）;ODS-C18色谱柱（250mm×4.6mm，20μm，大连依利特）;All-tech500型蒸发光散射检测器;HGA-2000空气发生器。对照品:黄芪甲苷（中国药品生物制品检定所提供），批号:0781-200307，供含量测定用。样品:补益蒺藜片三批，报产品时自制。试剂:乙腈为色谱纯（天津四友公司生产），其他试剂为分析纯;水为重蒸馏水（自制）。　　2方法与结果　　2.1色谱条件色谱柱为ODS-C18色谱柱（250mm×4.6

4、mm，20μm）;流动相:乙腈―水（1∶2）;进样量10μL;室温;流速1.0mL/min;ELSD参数:漂移管温度100℃，气体流速2.74mL/min。32.2供试品溶液制备取补益蒺藜片适量，去除薄膜衣，研碎，取细粉约2.0g，精密称定，置索氏提取器中，加甲醇100mL，热回流提取6h，提取液回收甲醇并浓缩至干，残渣加水15mL微热溶解，加乙醚振摇提取2次，每次20mL，弃去醚层，再用水饱和正丁醇振摇提取3次，每次20mL，合并正丁醇液，用氨试液提取2次，每次20mL，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加水5mL，使溶解，放冷，通过D101大孔树脂柱（1.5cm

5、×12cm），以水50mL洗脱，弃去水液，再以70%乙醇100mL洗脱，收集70%乙醇洗脱液，蒸干，用甲醇溶解，并定容至2mL量瓶中，经0.45μm微孔滤膜过滤后，作为供试品溶液。　　2.3线性关系考察精密称取黄芪甲苷对照品5.06mg，置10mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，得0.506mg/mL的对照品溶液。精密吸取上述对照品溶液4μL、8μL、12μL、16μL、20μL，按HPLC条件进样分析。以进样量（X）对峰面积（Y）作图，得到其标准曲线图。其回归方程Y=2.94×10-7X+0.02748，r=0.9996，n=5。黄芪甲苷对照品在2.024～10

6、.120μg范围内，进样量与峰面积间呈良好的线性关系。　　2.4精密度试验准确吸取上述对照品溶液10.0μL，注入液相色谱仪，测定峰面积值，重复进样6次，RSD=1.03%，n=6。结果表明，本法精密度较好。　　2.5稳定性试验取同一供试品溶液，分别于0h、1h、2h、4h、6h、8h测定黄芪甲苷的峰面积值.结果:RSD=0.78%，n=6。可知供试品溶液在8h内稳定。　　2.6重复性试验对同一批样品平行制备5份供试液，分别取10.0μL，注入液相色谱仪，进行含量测定，RSD=1.96%，n=5。表明本法重现性较好。　　2.7阴性对照试验取不含黄芪（蜜炙）的上

7、述处方药材，按工艺制备制成缺黄芪（蜜炙）的阴性制剂，按供试品溶液制备方法制成阴性溶液，分别吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性溶液各10.0μL，注入液相色谱仪，按上述条件进行测定，记录色谱图。从色谱图中可以看出，方中其他成分在本测定条件下，对黄芪甲苷的含量测定无干扰。见图1、图2、图3。图1对照品色谱图图2样品色谱图图3阴性样品色谱图2.8加样回收率试验3分别取已知含量为0.662mg/g的样品5份，每份约1.0g，均精密称定，分别加入黄芪甲苷对照品溶液1mL（浓度0.506mg/mL），按供试品溶液的制备方法，分别吸取供试品液各10.0μL，按照上述色谱条件，

8、测定黄芪甲苷的含量，计算加样回收率，结