fasfasl系统在人子宫内膜增生过长和子宫内膜癌中的表达

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1、Fas/FasL系统在人子宫内膜增生过长和子宫内膜癌中的表达作者：王红英，于月成，卜宁【摘要】目的：探讨Fas和Fas配体（FasL）在人子宫内膜增生过长和子宫内膜癌发病中的作用.方法：采用免疫组化链霉菌抗生物素蛋白过氧化物酶染色法（SP法）检测40例子宫内膜增生过长的异位内膜与18例子宫内膜癌内膜中Fas和FasL蛋白的表达；采用原位杂交方法检测FasLmRNA水平.设正常子宫内膜25例为对照组.结果：Fas蛋白在正常子宫内膜的阳性表达率为68%，在子宫内膜增生过长与子宫内膜癌组的阳性表达率分别为58％和22％，差异具有统计学意义（P<0.05）.FasL蛋白在子宫内膜增生过长

2、与子宫内膜癌组中的阳性表达率分别为68%和94%，明显高于对照组32%，差异具有统计学意义（P<0.05）.FasLmRNA的表达强度在子宫内膜增生过长与子宫内膜癌组亦明显高于对照组，差异具有统计学意义（P<0.05）.结论：Fas与FasL蛋白表达失调，可能是子宫内膜增生过长的发病机制之一，对子宫内膜癌组织逃避免疫系统监视具有重要作用.【关键词】Fas；Fas配体；子宫内膜增生；子宫内膜肿瘤Fas/FasL系统的生理功能在于通过对细胞凋亡的调节，限制某些细胞群落的过分膨胀或过分萎缩，参与正常细胞增殖、分化和凋亡动态平衡的维持，在临床多种疾病的发生过程中具有重要的作用［1-

3、2］.近年的研究发现，在多种肿瘤细胞出现Fas表达下调和FasL表达上调的现象,直接参与或间接促进了肿瘤逃避机体免疫系统的监视,从而有利于肿瘤细胞的进展和转移［3］.但有关Fas/FasL系统与子宫内膜增生过长和子宫内膜癌发生中的作用少见报道.本实验采用免疫组化和原位杂交方法检测Fas/FasL系统在子宫内膜增生过长和子宫内膜癌中的表达，旨在探讨其在子宫内膜癌发生发展中蛋白及基因表达的意义，为临床诊断和治疗提供依据.1材料和方法1.1材料选用第四军医大学西京医院妇产科200201/200304手术切除子宫标本83例.分为子宫内膜腺癌组18例，年龄（44.2±7.8）岁；子宫内膜增生

4、过长组40例，年龄（44.5±8.2）岁；以正常子宫内膜25例作为对照组，年龄（45.5±7.6）岁.子宫内膜腺癌采用国际妇产科联盟（IFGO）的三级分类法分为I级7例，II级5例，III级6例.子宫内膜增生过长按1985年国际妇科病理协会提出的分类标准进行分类，根据腺体增殖程度及腺上皮有无非典型性（atypical，ATP）分为四类：单纯性增殖不伴ATP11例，单纯性增殖伴有ATP12例，复杂性增殖不伴ATP9例，复杂性增殖伴有ATP8例.Fas和FasL多克隆抗体（兔抗人）及通用型超敏SPkit（福州迈新试剂公司）；FasL原位杂交试剂盒（武汉博士德试剂公司）；地高辛标记的FasL

5、mRNA多相寡核苷酸探针序列为：①5′CCCAGATCTACTGGGTGGACAGCAGTGCCA3′，②5′TATTCCAAAGTATACTTCCGGGGTCAATCT3′，③5′CTCTCTGGTCAATTTTGAGGAATCTCAGAC3′，由上海生工生物工程技术服务有限公司合成.1.2方法1.2.1免疫组化SP法测定Fas和FasL蛋白的表达水平标本经40g/L多聚甲醛固定，石蜡切片厚4μm，抗原经微波热修复，Fas及FasL一抗的工作浓度均为1∶100，DAB显色.操作方法按试剂盒说明书进行.1.2.2原位杂交法测定FasLmRNA石蜡切片常规脱蜡至水，30mL/

6、LH2O2室温处理10min，DEPC水洗2×5min，用胃蛋白酶37℃消化30min，0.5mol/LPBS洗3×5min，进行40℃预杂交3h，用滤纸吸去预杂交液，加入FasLmRNA探针的原位杂交液杂交过夜.以链霉素过氧化物酶（SABC）免疫组化法染色，DAB显色.操作方法参照说明书进行.1.2.3对照设计免疫组化分别用已知Fas和FasL均阳性的乳腺癌组织切片作为阳性对照，用PBS代替一抗作为阴性对照.原位杂交用杂交试剂盒内配置的阳性切片作为阳性对照，杂交过程中加不含标记探针的原位杂交液作为阴性对照.1.2.4结果判定免疫组化和原位杂交染色，以黄色和棕黄色为阳性信号.根据染色

7、强度和显色细胞比例的综合评分，将染色结果分为“-，+,,”四级：①按内膜组织中显色有无及深浅评分：无显色为0分，浅黄色或黄色为１分，棕黄色为2分，棕褐色为3分.②按内膜组织的显色比例评分：＜5%为0分，5%～25％为1分，25%～50％为2分，＞50%为3分.每例标本的积分为（①＋②）/2，按积分高低分为：0分为阴性（-），0.5～1分为弱阳性（+），1.5～2分为阳性（），2.5～3分为强阳性（）.统计学处理：应用SPSS11.0软件