fas-fasl系统在人子宫内膜增生过长和子宫内膜癌中的表达

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1、Fas/FasL系统在人子宫内膜增生过长和子宫内膜癌中的表达.L.编辑。【摘要】目的:探讨Fas和Fas配体(FasL)在人子宫内膜增生过长和子宫内膜癌发病中的作用.方法:采用免疫组化链霉菌抗生物素蛋白过氧化物酶染色法(SP法)检测40例子宫内膜增生过长的异位内膜与18例子宫内膜癌内膜中Fas和FasL蛋白的表达;采用原位杂交方法检测FasLmRNA水平.设正常子宫内膜25例为对照组.结果:Fas蛋白在正常子宫内膜的阳性表达率为68%,在子宫内膜增生过长与子宫内膜癌组的阳性表达率分别为58%和22%

2、,差异具有统计学意义(P<0.05).FasL蛋白在子宫内膜增生过长与子宫内膜癌组中的阳性表达率分别为68%和94%,明显高于对照组32%,差异具有统计学意义(P<0.05).FasLmRNA的表达强度在子宫内膜增生过长与子宫内膜癌组亦明显高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05).结论:Fas与FasL蛋白表达失调,可能是子宫内膜增生过长的发病机制之一,对子宫内膜癌组织逃避免疫系统监视具有重要作用.【关键词】Fas;Fas配体;子宫内膜增生;子宫内膜肿瘤  Fas/FasL系

3、统的生理功能在于通过对细胞凋亡的调节,限制某些细胞群落的过分膨胀或过分萎缩,参与正常细胞增殖、分化和凋亡动态平衡的维持,在临床多种疾病的发生过程中具有重要的作用[1-2].近年的研究发现,在多种肿瘤细胞出现Fas表达下调和FasL表达上调的现象,直接参与或间接促进了肿瘤逃避机体免疫系统的监视,从而有利于肿瘤细胞的进展和转移[3].但有关Fas/FasL系统与子宫内膜增生过长和子宫内膜癌发生中的作用少见报道.本实验采用免疫组化和原位杂交方法检测Fas/FasL系统在子宫内膜增生过长和子宫内膜癌中的表达

4、,旨在探讨其在子宫内膜癌发生发展中蛋白及基因表达的意义,为临床诊断和治疗提供依据.  1材料和方法  1.1材料  选用第四军医大学西京医院妇产科200201/200304手术切除子宫标本83例.分为子宫内膜腺癌组18例,年龄(44.2±7.8)岁;子宫内膜增生过长组40例,年龄(44.5±8.2)岁;以正常子宫内膜25例作为对照组,年龄(45.5±7.6)岁.子宫内膜腺癌采用国际妇产科联盟(IFGO)的三级分类法分为I级7例,II级5例,III级6例.子宫内膜增生过长按1985年国际妇科病理协

5、会提出的分类标准进行分类,根据腺体增殖程度及腺上皮有无非典型性(atypical,ATP)分为四类:单纯性增殖不伴ATP11例,单纯性增殖伴有ATP12例,复杂性增殖不伴ATP9例,复杂性增殖伴有ATP8例.    Fas和FasL多克隆抗体(兔抗人)及通用型超敏SPkit(福州迈新试剂公司);FasL原位杂交试剂盒(武汉博士德试剂公司);地高辛标记的FasLmRNA多相寡核苷酸探针序列为:①5′CCCAGATCTACTGGGTGGACAGCAGTGCCA3′,②5′TATTCCAAAGTAT

6、ACTTCCGGGGTCAATCT3′,③5′CTCTCTGGTCAATTTTGAGGAATCTCAGAC3′,由上海生工生物工程技术服务有限公司合成.  1.2方法  1.2.1免疫组化SP法测定  Fas和FasL蛋白的表达水平标本经40g/L多聚甲醛固定,石蜡切片厚4μm,抗原经微波热修复,Fas及FasL一抗的工作浓度均为1∶100,DAB显色.操作方法按试剂盒说明书进行.  1.2.2原位杂交法测定  FasLmRNA石蜡切片常规脱蜡至水,30mL/LH2O2室温处理10min,DE

7、PC水洗2×5min,用胃蛋白酶37℃消化30min,0.5mol/LPBS洗3×5min,进行40℃预杂交3h,用滤纸吸去预杂交液,加入FasLmRNA探针的原位杂交液杂交过夜.以链霉素过氧化物酶(SABC)免疫组化法染色,DAB显色.操作方法参照说明书进行.  1.2.3对照设计  免疫组化分别用已知Fas和FasL均阳性的乳腺癌组织切片作为阳性对照,用PBS代替一抗作为阴性对照.原位杂交用杂交试剂盒内配置的阳性切片作为阳性对照,杂交过程中加不含标记探针的原位杂交液作为阴性对照.  1.2.4

8、结果判定  免疫组化和原位杂交染色,以黄色和棕黄色为阳性信号.根据染色强度和显色细胞比例的综合评分,将染色结果分为“-,+,,”四级:①按内膜组织中显色有无及深浅评分:无显色为0分,浅黄色或黄色为1分,棕黄色为2分,棕褐色为3分.②按内膜组织的显色比例评分:<5%为0分,5%~25%为1分,25%~50%为2分,>50%为3分.每例标本的积分为(①+②)/2,按积分高低分为:0分为阴性(-),0.5~1分为弱阳性(+),1.5~2分为阳性(),2.5~3分为强阳

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