体外非接触共培养诱导骨髓间充质干细胞向肺泡上皮细胞的分化

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1、体外非接触共培养诱导骨髓间充质干细胞向肺泡上皮细胞的分化作者：王艳，杨志军，何玺玉，封志纯【摘要】目的建立体外非接触共培养模型，诱导小鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)向肺泡上皮细胞的分化。方法分三组，每组6例。对照组：小鼠MSCs单独培养组；实验组A：正常肺组织单细胞悬液+MSCs；实验组B：损伤肺组织单细胞悬液+MSCs。共同培养8d，激光共聚焦和RT-PCR检测共培养体系下室中的SP-C和AQP5的表达情况。结果对照组和实验组A都只检测到AQP5；而实验组B可同时检测到AQP5和SP-C。实验组B的AQP5mRNA的表达量较对照组明显增多(P<0.01)，而与实验组A比较，其

2、AQP5mRNA的表达量也有统计学差异(P<0.01)。但是，实验组A与对照组比较则无明显统计学差异(P>0.05)。结论本实验室成功建立了体外非接触诱导小鼠MSCs分化为肺泡上皮细胞的实验模型。【关键词】骨髓间充质干细胞；肺泡上皮细胞；激光共聚焦ChinaABSTRACT:ObjectiveToestablishtheco-culturemodelinvitroandinducebonemarrowmesenchymalstemcells(MSCs)todifferentiateintolungalveolarepithelialcells.MethodsEachgro

3、uphad6samples,controlgroupwasMSCsalone;Group14AwastheMSCsculturedwiththecellsfromnormallung;andGroupBwastheMSCswiththecellsfrominjuriedlung.Eachgroupwasculturedfor8daysandthetwomarkersoflungalveolarepithelialcellsincludingAQP5andSP-CweretestedbylaserconfocalmicroscopyandRT-PCR.ResultsOnlyAQP5wa

4、sdetectedinthecontrolgroupandGroupA,bothAQP5andSP-CweredetectedinGroupB,theAQP5mRNAexpressioninGroupBwassignificantlyincreasedcomparedwiththatinthecontrolgroup(P<0.01).TheAQP5mRNAexpressioninGroupBwasalsosignificantlyincreasedcomparedwiththatinGroupA(P<0.01).Buttherewasnosignificantdiffer

5、enceinAQP5mRNAexpressionbetweenGroupAandcontrolgroup.ConclusionWehavesuccessfullyestablishedtheco-culturemodelinvitrotoinducebonemarrowmesenchymalstemcellstodifferentiateintolungepithelialcells.　　KEYWORDS:mesenchymalstemcells;lungalveolarepithelialcell;laserconfocalmicroscopy　　　骨髓间充质干细胞(mesench

6、ymalstemcells,14MSCs)是一种具有多分化潜能的干细胞，在不同的培养条件下可分化为一系列的细胞类型。肺损伤体内实验研究表明，肺损伤小鼠移植MSCs后，MSCs可转化为肺泡Ⅱ型(typeⅡalveolarepithelialcell,AECⅡ)和Ⅰ型上皮细胞(typeⅠalveolarepithelialcell,AECI)等，以修复损伤肺组织[1]。ROJAS等[2]研究发现，在体外损伤肺组织分泌的因子可以诱导MSCs增殖并向损伤肺迁移，而正常肺组织细胞并没有此功能。POPOV等[3]采用MSCs与肺上皮细胞(A549)非接触共同培养，成功诱导MSCs向肺上皮细胞分化

7、。本研究采用MSCs与肺组织单细胞悬液非接触共培养模型，观察能否在体外利用损伤肺组织诱导MSCs向肺泡上皮细胞分化,为进一步研究骨髓源性的间充质干细胞治疗肺损伤奠定基础。　　1材料与方法　　1.1材料　　出生4周的健康昆明小鼠，体重为10.0～11.5g，共25只，均为雄性(中国医学科学院实验动物中心提供)。DMEM完全培养基和标准胎牛血清(GIBCO公司，美国)，胰蛋白酶(Sigma公司，美国)。TaqDNA聚合酶(TaKaRa公司，日本)，RT-PCR