c基因型hbv转基因小鼠的制备

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1、C基因型HBV转基因小鼠的制备作者：尤玉琴，黄黎珍，刘光泽，佟明华，李秀梅，胡莲美，顾为望，孔祥平【摘要】　　目的：建立C型HBV转基因小鼠，为乙肝防治研究提供实验动物模型.方法：采用受精卵显微注射法，制备HBV转基因小鼠，用PCR，ELISA,荧光定量PCR和免疫组化的方法研究HBV基因在转基因小鼠体内的整合、复制和表达情况.结果：注射受精卵2840枚，筛选注射后成活的受精卵共2256枚，注射成活率79.4％.注射后受精卵共移植假孕雌鼠85只，其中有42只怀孕，假孕雌鼠妊娠率49％，共产下F0代小鼠168只，PCR检测共有14只小鼠阳性，其中ELISA检测血清HBsAg阳性5只,HBe

2、Ag均阴性.荧光定量PCR血清HBVDNA显示，2只小鼠的拷贝数分别为3.12×105copies/L,1.98×105copies/L，经传代产下F1代小鼠61只，PCR检测HBVDNA阳性5只，ELISA检测HBsAg阳性4只，其中肝脏HBsAg免疫组化阳性2只，HBcAg均阴性，且肝组织表达HBsAg为胞浆型.结论：构建的C型HBV基因不但可以在转基因小鼠体内进行复制表达，而且可以遗传给下一代小鼠.【关键词】肝炎病毒乙型小鼠转基因肝炎表面抗原乙型肝炎核心抗原乙型血清DNA11　　【Abstract】AIM：TogenerateHBV(C)genometransgenicmiceto

3、providesuitableanimalmodelsfortherelatedresearchesinChina.METHODS：TheHBVtransgenicmiceweregeneratedbymicroinjectionof1.3copiesHBVgenomeintothepronucleusofFVB/Nzygotes.ThePCRassay,ELISA,RT-PCRandimmunohistochemicalmethodswereusedtodetecttheHBVintegration,replicationandexpressioninthetransgenicmice

4、.RESULTS：Inthisstudy,2840zygoteswereinjected,thesurvived2256zygotesaftermicroinjectionwerereimplantedintotheoviductsof85psudopregnantKMfemalemice.Afterbirth,42femalemicewerepregnantand168F0offspringswereborn.PCRanalysisindicatedthat14outof168F0wereintegratedwithHBVgenome.WithELISA,5ofthemexpresse

5、dHBsAginserum.AndtwomicewerepositiveforHBVDNAreplicationinserumwith3.12×105copies/Land1.98×105copies/Lrespectively.Thenthetransgenicmicewerematedtonormalmicetoestablishtransgenicmousestrain.61F1offspringswereborn.Furtherstudydemonstratedthat5ofthemwereintegratedwithHBVgenomebyPCR,4ofthemwereserum

6、HBsAgpositivebyELISAand2ofthemwiththeintracellulardistributionofHBsAginhepatocytesbyimmunohistochemistry.BothserumHBeAgandliverHBcAg11immunohistochemistrywerenegative.CONCLUSION：TheestablishedHBV(C)genomecouldbenotonlyreplicatedandexpressedintransgenicmicebutalsoinheritedtothenextgenerations.　　【K

7、eywords】hepatitisBvirusmicetransgenic,hepatitisBsurfaceantigens;hepatitisBcoreantigens；serum;DNA　　0引言　　根据HBV基因序列的差异＞8%，可将HBV毒株分为不同的基因型，目前已确定有A-H8个基因型.不同基因型呈一定的地理区域性分布，并且HBV基因型与其流行特征、致病性、疾病治疗及预后等方面存在十分紧密的关系［1-5］.我国HBV的主