天然茯苓和液体发酵茯苓质量标准的研究

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1、天然茯苓和液体发酵茯苓质量标准的研究作者：李羿,万德光,钟世红,李晨【摘要】液体发酵茯苓为采用现代发酵工程技术生产的一种新型发酵中药。2005年版中国药典茯苓的质量标准尚不完善。笔者在粉末显微特征、三萜类化合物、多糖、灰分和氨基酸含量等方面,对液体发酵茯苓和天然茯苓展开研究,建立其质量标准,为其质量控制打下基础。【关键词】天然茯苓;液体发酵茯苓;质量标准　　【Abstract】TheliquidfermentedPoriacocosisanewtypeoffermentedtraditionalChinesemedicineproducedbymodern

2、fermentationtechnology.ThestandardofPoriacocosisnotperfectinChinesePharmacopeia(2005).Westudiedthemicroscopiccharacteristics,terpenoids,polysaccharides,ashandaminoacidscontentofnaturalPoriacocosandliquidfermentedPoriacocos.Thus,thestandardsofnaturalPoriacocosandliquidfermentedPori

3、acocoswereestablished,whichprovidedabasisforitsqualitycontrol.　　【Keywords】naturalPoriacocos;liquidfermented11Poriacocos;qualitystandard　　茯苓为多孔菌科真菌茯苓Poriacocos(Schw.)Wolf的干燥菌核,为利水渗湿要药[1]。茯苓可通过野生采集、人工栽培和发酵培养三个途径获得。除野生采集获得天然茯苓外,可采用传统的茯苓栽培法(固体发酵)来生产天然茯苓[2],或采用现代发酵工程技术来生产液体发酵茯苓[3]。天然茯苓

4、和液体发酵茯苓由于发酵培养基和发酵方式不同,导致天然茯苓和液体发酵茯苓(发酵中药茯苓)的代谢途径和代谢产物有所差异。因此,液体发酵茯苓为一种新型发酵中药[46]。2005年版中国药典仅在检查项目中对茯苓水分、总灰分和酸不溶性灰分有定量要求,而对茯苓主要活性成分多糖、三萜类化合物都未有明确要求[7]，对液体发酵茯苓质量标准的制定工作尚未开展，缺乏完善的天然茯苓和液体发酵茯苓质量标准,严重地影响了茯苓质量的有效控制和资源的开发利用。因此,笔者在对天然茯苓和液体发酵茯苓研究的基础上,制定了天然茯苓和液体发酵茯苓的质量标准,为茯苓相关保健食品和药品的开发打下基础

5、。　　1材料与方法　　1.1试验材料11　　天然茯苓为购于成都杏林大药房的茯苓丁。液体发酵茯苓为经发酵罐补料液体发酵5d的发酵液离心干燥后所得[8]。　　酵母浸膏、蛋白胨为Oxoid产品;苯酚(须重蒸);薄层层析硅胶GF254(青岛海洋化工有限公司);葡萄糖、K2HPO4、MgSO4.7H2O、盐酸、氯仿、丁醇、乙醇、丙酮、乙醚和NaOH等试剂均采用国产分析纯。　　全温振荡器(哈尔滨东联电子技术开发有限公司);NBSBiofloⅢ型发酵罐;BeckmanJ2HS型离心机;SartoriusBP121S型电子天平;LeicaDM1000型显微镜;Lambd

6、a35UV/VISSpectrometer紫外分光光度仪;ZF90型暗箱式紫外透射仪(上海顾村电光仪器厂);氨基酸自动分析仪;灰分测定装置;FW177型粉碎机。　　1.2茯苓粉末的制备　　将烘干的液体发酵茯苓和天然茯苓分别放入粉碎器中粉碎,过筛(筛子孔径为0.17～0.25μm),烘箱中60℃烘干至恒重,装入有塞瓶中,贴上标签,放入干燥器内备用。　　1.3茯苓粉末的显微鉴定　　1.3.1茯苓粉末的临时水装片11洗净擦干载玻片及盖玻片。用玻璃吸管加1滴蒸馏水于载玻片中央,用镊子取少许制备的液体发酵茯苓和天然茯苓粉末于蒸馏水中,用解剖针搅匀,再盖上盖玻片,注

7、意不要产生气泡，多余液体用小滤纸条吸干。　　1.3.2茯苓粉末的临时水合氯醛装片洗净擦干载玻片及盖玻片。用玻璃吸管加1滴水合氯醛溶液于载玻片中央,用镊子取少许制备的液体发酵茯苓和天然茯苓粉末于液滴中,用解剖针搅匀,接着手持载玻片的一端于酒精灯上均匀加热(注意加热时不要使液体沸腾,以免产生大量的气泡),然后离开酒精灯,加1滴稀甘油充分混匀,如此加热3～5次。加盖玻片,并将多余的封藏液用小滤纸条吸干。　　1.3.3茯苓粉末的显微观察观察菌丝团块采用水装片;观察菌丝采用水合氯醛透化装片。将制备好的液体发酵茯苓或天然茯苓样品分别置于显微镜下,先用低倍镜观察,再换用

8、高倍镜观察。　　1.4茯苓粉末三萜类化合物的薄层层析　　1.4.1