短短芽孢杆菌YNP-1的分离及其抗菌物质的初步鉴定

《短短芽孢杆菌YNP-1的分离及其抗菌物质的初步鉴定》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、论文分类号：１学校代码：１０７０８学号：１５０４００２ＳＨＡＡＮＸＩＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹＯＦＳＣＩＥＮＣＥ＆ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ硕士学位论文Ｔ＇ｈｅｓｉｓｆｏｒＭａｓｔｅｒｓＤｅｇｒｅｅ短短芽孢杆菌ＹＮＰ－ｌ的分离及其抗菌物质的初步鉴定王忠忠指导教师姓名：龚国利教授学科名称：发酵工程论文提交日期：２０１８年３月论文答辩日期：２０１８年５月ｍＩ｜｜■■学位授予单位：陕西科技大学ｍｍｍｍｍｍｍｍｍｍｍｍｍｍｍｍｍｍｍｍｍｍｍｍａｍｍｍｍｍｍａｍｗｍｍｍ■＿＿＿ｉ＿＿ａａ—ａ————————■■■■■■■

2、————————Ｈ—ＭＭＩ—申请工学硕士学位论文论文题目：短短芽孢杆菌YNP-1的分离及其抗菌物质的初步鉴定学科门类：工学一级学科：轻工技术与工程培养单位：食品与生物工程学院硕士生：王忠忠导师：龚国利教授2018年5月IsolationofBrevibacillusbrevisYNP-1andPreliminaryIdentificationofItsAntibacterialSubstanceAThesisSubmittedtoShaanxiUniversityofScienceandTechnologyinPartialFulfillmentoftheRequiremen

3、tfortheDegreeofMasterofEngineeringScienceByZhong-zhongWangSupervisor:Prof.GuoliGongMay2018短短芽孢杆菌YNP-1的分离及其抗菌物质的初步鉴定摘要短短芽孢杆菌是一种严格好氧的革兰氏阳性芽孢杆菌，广泛分布于植物根际土壤、海水、湿地、淤泥等生态环境中。其作为拮抗菌株产生的抗菌物质具有多种用途，例如可作为食品防腐剂，饲料添加剂以及农业上的生防试剂等。猕猴桃溃疡病是致使猕猴桃产量与品质下降的毁灭性细菌病害，本论文的主要目的是从自然界土样中分离对猕猴桃溃疡病致病菌-丁香假单胞菌猕猴桃致病变种S01（Pse

4、udomonas.syringaepv.actinidiaeS01）具有强抗菌活性的拮抗菌株；优化拮抗菌株产抗菌物质的发酵工艺；探究抗菌物质粗提物的部分理化性质；分离纯化抗菌物质，并初步鉴定该抗菌物质的类型与结构。本论文主要研究结果如下:（1）从采集的12份土样中分离出3株对丁香假单胞菌猕猴桃致病变种S01具有抑菌活性的耐高温菌株，在自然条件下，挑取抑菌活性最强的菌株命名为“YNP-1”。通过形态学观察，16SrDNA测序分析，生理生化试验将菌株YNP-1鉴定为短短芽孢杆菌。（2）采用单因素试验，Plackett-Burman试验设计，最陡爬坡试验及响应面分析优化短短芽孢杆菌YNP

5、-1发酵培养基和发酵工艺，得到菌株YNP-1产抗菌物质最佳发酵培养基和发酵工艺条件为：糊精浓度15g/L、蛋白胨浓度23.0g/L、CaCl浓度1.5g/L、Tween-20添加量0.99%、发酵时间68.0h、初始2pH7.5、发酵温度30.0℃、菌种接种量8.0%、摇床转速190.0rpm、摇瓶装液量76.0mL。在该条件下，短短芽孢杆菌YNP-1生产的抗菌物质抑菌圈直径(抑菌活性)为25.8mm。采用优化发酵培养基与发酵工艺进行发酵，菌株YNP-1产生的抗菌物质的抑菌活性提高了33%。（3）利用低温乙醇沉淀法提取短短芽孢杆菌YNP-1发酵产生的抗菌物质，24h冷冻干燥抗菌粗提

6、物，称取0.1g干燥样品溶解于1mL的磷酸盐缓冲液(PBS,25mmol/L)中，进行抗菌物质部分理化性质的探究。经试验发现短短芽孢杆菌YNP-1产生的抗菌物质对热稳定，能够在100℃水浴中煮沸10min以上而不丧失抑菌活性；pH3～11的范围内抗菌活性稳定；对蛋白酶Ik和木瓜蛋白酶不敏感；低温储藏12个月抗菌活性几乎不变；在一定的时间内可耐受紫外线照射；最大吸收波长在280nm左右；具有广谱的抑菌特性，对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌均显示出很强的拮抗作用。（4）利用分子量为8～14kDa的透析袋对抗菌粗提物进行48h透析处理，然后依次采取SephadexG-150凝胶过滤，DEAE

7、-52阴离子层析，反相高效液相色谱(RP-HPLC)分析等方法分离纯化抗菌物质，非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测抗菌物质的类型，生物质谱技术初步鉴定抗菌物质的结构。实验结果表明：短短芽孢杆菌YNP-1产生的主要抗菌成分能够被分子量为8～14kDa的透析袋截留，SephadexG-150、DEAE-52、(RP-HPLC)等层析分离后获得的部分洗脱峰溶液具有抑菌活性，Native-PAGE试验证明收集的高效液相色谱活性峰中的主要抗菌成分是蛋白质类物质，生物质谱技术（LC-M