腺病毒介导胞嘧啶脱氨酶基因联合αIFN治疗肾癌的实验观察.doc

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1、腺病毒介导胞嘧啶脱氨酶基因联合αIFN治疗肾癌的实验观察【摘要】目的:探讨腺病毒介导的胞嘧啶脱氨酶(CD)自杀基因联合αIFN对肾癌的治疗作用.方法:含CD基因重组腺病毒感染人肾癌细胞株7860，用噻唑蓝(MTT)方法观察加用5氟胞嘧啶（5Fc）或联用αIFN后的杀伤效应.建立7860裸鼠皮下移植瘤模型，瘤内注射腺病毒，腹腔注射5Fc(500mg/kg)，联合应用αIFN时行瘤内注射，观察肿瘤生长情况.结果:在对感染腺病毒的7860细胞的体外杀伤实验中，CD+5Fc组的细胞存活率为(67.40±1.27)%，αIFN组的细胞存活率为(68.65±1.45)

2、%，CD+5Fc+αIFN组细胞存活率为(34.67±2.38)%,(P=0.000)，两者之间有协同效应.在7860裸鼠移植瘤模型中，CD+5Fc联合αIFN能够显著抑制肿瘤的生长.结论:腺病毒为载体的自杀基因CD加前体药5Fc联合αIFN可以明显增强抗肾癌效果.【关键词】腺病毒科；遗传载体；基因疗法；胞嘧啶脱氨酶；基因；干扰素α；腺癌，透明细胞；肾肿瘤　　【Abstract】AIM:Tostudythecytotoxicefficacyofrecombinedtreatmentofhumanrenalclearcarcinomawithadenovirusmed

3、iatedcytosinediaminase(CD)geneand2IFN.METHODS:AdenoviruscontainingsuicidegeneCDwasusedtoinfecthumanrenalclearcarcinomacells7860,andinvitrocytotoxicityofinfected7860cellstreatedby5Fcor/andαIFNwereevaluatedwithMTTmethod.Thetumorgrowthsuppressiontestwasperformedwithnudemicemodelbearing7860

4、subcutaneouslyinjectedintratumorallywithAdCDcombinedwith5Fc(400mg/kg)andαIFN(105u/L).RESULTS:Therateofcellsurvivalwasonly(34.67±2.38)%intheCD+5Fc+αIFNgroup,but(67.40±1.27)%intheCD+5Fcgroupand(68.65±1.45)%intheαIFNgroup(P=0.000).5FcandαIFNhadobvioussynergiceffects.AdCDcombinedwith5F

5、candαIFNsignificantlysuppressedthegrowthoftumorinnudemicemodel.CONCLUSION:RecombinantadenoviruscombinedwithprodrugandαIFNhasasignificantefficacyintreatmentofhumanrenalclearcarcinoma.　　【Keywords】adenoviridae;geneticvectors;genetherapy;cytosinedeaminase;genes;interferonalpha;adenocarcinoma,c

6、learcell;kidneyneoplasms　　0引言　　肾癌的国外发病率呈上升趋势，每年死于肾癌者近万例［1］，在我国也有逐年增加趋势.6早期无转移性肾癌，根治性手术是首选方案，但术后仍有复发和转移的可能，大约40%～70%的患者术后会出现肿瘤远处转移［2］.晚期肾癌对放疗及化疗均不敏感,自杀基因及细胞因子治疗作为晚期肾癌的一种治疗方法，在肾癌的综合治疗中发挥了重要作用.大肠杆菌胞嘧啶脱胺酶（E.coli.cytosinedeaminase,CD）基因/5氟胞嘧啶（5Fc）治疗系统是单纯疱疹病毒胸苷激酶（herpessimplexvirusthymidinekinas

7、e,HSVTK）基因/无环鸟苷(GCV)系统后受广泛关注的新的自杀基因，同时细胞因子在实体肿瘤治疗中也进行了广泛的研究.本研究旨在探讨CD/5Fc系统及细胞因子在肾癌治疗中的价值.　　1材料和方法　　1.1材料人肾透明细胞癌株7860来源于中山大学生物教研室；HEK293细胞（南方医科大学泌尿外科保存）；含有含有大肠杆菌胞嘧啶脱胺酶（E.colicytosinedeaminase,CD）基因和绿色荧光蛋白（greenfluorescentprotein,GFP）基因的复制缺