腺病毒介导胞嘧啶脱氨酶基因联合αifn治疗肾癌的实验观察

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1、腺病毒介导胞嘧啶脱氨酶基因联合αIFN治疗肾癌的实验观察【摘要】目的:探讨腺病毒介导的胞嘧啶脱氨酶(CD)自杀基因联合αIFN对肾癌的治疗作用.方法:含CD基因重组腺病毒感染人肾癌细胞株7860，用噻唑蓝(MTT)方法观察加用5氟胞嘧啶（5Fc）或联用αIFN后的杀伤效应.建立7860裸鼠皮下移植瘤模型，瘤内注射腺病毒，腹腔注射5Fc(500mg/kg)，联合应用αIFN时行瘤内注射，观察肿瘤生长情况.结果:在对感染腺病毒的7860细胞的体外杀伤实验中，CD+5Fc组的细胞存活率为(67.40±1.27)%，αIFN组的细胞存活率为(68.65±

2、1.45)%，CD+5Fc+αIFN组细胞存活率为(34.67±2.38)%,(P=0.000)，两者之间有协同效应.在7860裸鼠移植瘤模型中，CD+5Fc联合αIFN能够显著抑制肿瘤的生长.结论:腺病毒为载体的自杀基因CD加前体药5Fc联合αIFN可以明显增强抗肾癌效果.【关键词】腺病毒科；遗传载体；基因疗法；胞嘧啶脱氨酶；基因；干扰素α；腺癌，透明细胞；肾肿瘤　　【Abstract】AIM:Tostudythecytotoxicefficacyofrebinedtreatmentofhumanrenalclearcarcinomaediatedcyt

3、osinediaminase(CD)geneand2IFN.METHODS:AdenoviruscontainingsuicidegeneCDanrenalclearcarcinomacells7860,andinvitrocytotoxicityofinfected7860cellstreatedby5Fcor/andαIFNethod.Thetumorgroedicemodelbearing7860subcutaneouslyinjectedintratumorallyg/kg)andαIFN(105u/L).RESULTS:Therateofcell

4、survivalorinnudemicemodel.CONCLUSION:Rebinantadenovirusbinedentofhumanrenalclearcarcinoma.　　【Keyinase;genes;interferonalpha;adenocarcinoma,clearcell;kidneyneoplasms　　0引言　　肾癌的国外发病率呈上升趋势，每年死于肾癌者近万例［1］，在我国也有逐年增加趋势.早期无转移性肾癌，根治性手术是首选方案，但术后仍有复发和转移的可能，大约40%～70%的患者术后会出现肿瘤远处转移［2］.晚期肾癌对放疗及化疗均不敏感,

5、自杀基因及细胞因子治疗作为晚期肾癌的一种治疗方法，在肾癌的综合治疗中发挥了重要作用.大肠杆菌胞嘧啶脱胺酶（E.coli.cytosinedeaminase,CD）基因/5氟胞嘧啶（5Fc）治疗系统是单纯疱疹病毒胸苷激酶（herpessimplexvirusthymidinekinase,HSVTK）基因/无环鸟苷(GCV)系统后受广泛关注的新的自杀基因，同时细胞因子在实体肿瘤治疗中也进行了广泛的研究.本研究旨在探讨CD/5Fc系统及细胞因子在肾癌治疗中的价值.　　1材料和方法　　1.1材料人肾透明细胞癌株7860来源于中山大学生物教研室；HEK293细胞（南

6、方医科大学泌尿外科保存）；含有含有大肠杆菌胞嘧啶脱胺酶（E.colicytosinedeaminase,CD）基因和绿色荧光蛋白（greenfluorescentprotEin,GFP）基因的复制缺陷腺病毒（AdCMVCD，orAdv）（美国洛杉矶儿童医院惠赠，南方医科大学南方医院泌尿外科保存）；5周龄、雌性BALB/C裸鼠购自广州中医药大学实验动物中心（许可证SCxK<粤>20030001）.噻唑蓝(MTT),5Fc,αIFN购于Sigma公司；逆转录聚合酶链反应(RTPCR)kit购于大连宝生物公司；DMEM、胎牛血清为Gibco公司产品；绵

7、羊AntiCD多克隆抗体购于SantoCruz公司，HRP兔抗绵羊二抗及ECL发光试剂盒购于北京中山生物技术有限公司.CD基因和腺病毒E1基因的引物合成由上海英骏生物技术有限公司合成.　　1.2方法　　1.2.1重组腺病毒扩增及滴度的测定用293细胞扩增腺病毒.将7860按2×104接种于96孔板，每孔100μL，第2d加入待检病毒悬液60μL，预稀释10倍，按2倍倍比稀释，继续培养，48h后观察细胞病变情况，并计算病毒滴度.　　1.2.2腺病毒载体CD基因PCR鉴定根据GenebankS56903CD基因DNA序列，由上海英骏生物