糙海参酸性粘多糖的分离及特性研究

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1、维普资讯http://www.cqvip.com盔基蕊糙海参酸性粘多糖的分离及特性研究陈健郑艾初肖凯军林福兰(华南理工大学轻工与食品学院，广州，510640)摘要研究了糙海参酸性粘多糖酶水解及乙醇沉淀的分离纯化方法，通过GPC测定其重均分子质量为59934u，研究了其光谱特性。其氨基半乳糖、葡萄糖醛酸、岩藻糖、硫酸根含量分别为16．40％、19．40％、11．08％和28．15％，通过对其理化性质的研究，为更好地利用这一生物资源提供了依据。关键词糙海参，粘多糖，分离纯化，光谱特性糙海参(HolothuriascabraJaeger)属棘皮动物门糙海参去内脏、洗净、粉碎，加2倍水，加0．4

2、％海参纲，海参科，又名象牙参、白参、明玉参等，体长海参质量的木瓜蛋白酶，55℃，pH6．0～6．5水解126～20cm，直径1～6cm，表面呈黄白色，在我国主要h，加热至85℃灭酶，6000r／min离心10min，得上清分布于西沙、海南、广东中西部，是南海最常见的食用液，经减压浓缩，40％乙醇沉淀，再经丙酮、乙醇脱脂，海参。研究表明，海参酸性粘多糖具有抗肿瘤、降血得海参粗多糖。脂、抗凝血等药理活性，糙海参是理想的药食两用材粗多糖重新溶解于去离子水，分别以717和732料[1l。离子交换树脂纯化，30％H2o2溶液脱色，三氯乙酸法除蛋白、透析，经DEAE—SepharoseF．F．柱层析

3、1槠、糌与方法(2．5×18cm)进行分级纯化，以0．5mol／L的NaC11．1实验材料与试剂为洗脱剂，按5mL体积分部收集，以硫酸一苯酚比色海参，购于广州海产品市场，为冷冻鲜品，经中国法测定多糖含量，合并多糖出峰部分，真空冷冻干燥科学院南海海洋研究所张汉华研究员鉴定为糙海参。得白色纯品。甲苯氨蓝(中国医药集团上海化学试剂公司)，咔1．3．2琼脂糖凝胶电泳分析L3J唑(中国医药集团上海化学试剂公司)，地衣酚(上海以巴比妥缓冲液0．06mol／L(pH8．5)配置成化学试剂一厂)，D一(+)氨基半乳糖(Sigma公司)，盐0．8％琼脂糖液，于80℃水浴加热制胶。上样量8酸一L一半胱氨酸(

4、上海润捷化学试剂有限公司)，D一岩L，在105V下电泳40rain，以0．1％十六烷基三甲藻糖(AlfaAesar公司)，葡聚糖硫酸钠(天津川页生基溴化铵溶液固定，于50℃烘箱干燥，冷却后置甲苯化制品有限公司)，肝素钠(中国医药集团上海化学试胺蓝溶液染色，以脱色液[V(乙酸)：V(乙醇)：V剂公司，160IU／mg)，硫酸软骨素C(Sigma公司)，(水)=0．1：5：5]漂至背景无色为止。葡聚糖标准品系列(Sigma公司，分子质量为4400u、1．3．3凝胶渗透色谱法分子量的测定9900u、21400u、43500u、124000u、196000u、277凝胶色谱柱为TSKG5000P

5、wxL及000u、401000u)。TSKG3000PwxL双柱串接，前接保护柱，柱温40"(2，1．2实验仪器和设备流动相为0．02mol／LKH2PO4，流速0．6mLminoWatersBreeze凝胶渗透色谱仪(美国Waters公1．3．4红外光谱测定司)，pHS一25型酸度计(上海雷磁仪器厂)，水平电将糙海参酸性粘多糖与KBr压片，再以傅立叶泳仪(大连科迈仪器公司)，uV一2102PC紫外可见分变换红外光谱仪进行扫描，扫描范围4000～400光光度计(上海Unico公司)，7200分光光度计(上海cm。Unico公司)，红外光谱仪(德国Bruker公司)，冷冻干1．3．5蛋白质

6、测定燥机(Beckman公司)。以uV一2102PC紫外可见分光光度计进行紫外1．3实验方法扫描，扫描范围190～400nm。1．3．1糙海参粘多糖的分离纯化J1．3．6硫酸基含量测定Bat12一硫酸比浊法4J。第一作者：博士，讲师。收稿日期：2006—05—17分别取0．01mol／L的K2S04溶液0、20、40、60、堡蔓丝鲞蔓!Q塑星蔓塑2J123维普资讯http://www.cqvip.comFOODANDFERMENTATIONINDUSTRIES80、100、120、140、180、200L于0～10号的试管中，mLH2SO4溶液[V(浓硫酸)：V(水)=6：1]摇匀后各管

7、均补水至200L，加入3．8mL4％的三氯乙酸，静置15min，沸水浴10min，冷却，加入0．1mL3％再加入1mL0．5％的BaCI2明胶溶液，室温下静置盐酸半胱氨酸，摇匀，静置60min，以空白白管调零，10～20min再测定360nm下的吸光度值，另取22测456nm处光吸收值，空白管以双蒸水代替粘多mg糙海参多糖，溶于5mL6moI／L的HC1中，IO0*C糖，其余操作同，以纯的D一岩藻糖为标准，根据标准油浴中加热6h，取