雪莲果块茎中绿原酸及总酚酸的含量测定

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·230·JournalofChineseMedicinalMaterials第32卷第2期2009年2月雪莲果块茎中绿原酸及总酚酸的含量测定3石晋,栾雨时,赵宁(大连理工大学环境与生命学院,辽宁大连116023)摘要目的:测定雪莲果块茎中有效成分绿原酸及总酚酸的含量。方法:绿原酸的测定分析采用高效液相色TM谱法。色谱柱:WatersSunFireC18(150mm×416mm,5μm);流动相:甲醇21%乙酸水溶液,二元梯度程序洗脱;流速:018mL/min;检测波长:326nm。总酚酸的测定采用分光光度法,以没食子酸为对照品,在725nm波长处进行测定。结果:绿原酸含量在014～418μg范围时与峰面积呈良好线性关系(r=019990),加样回收率为97128%;RSD为1142%。总酚酸的线性范围为0102～0110mg/mL(r=019990),加样回收率为96181%;RSD为1164%。结论:方法灵敏准确,适用于雪莲果块茎中绿原酸及总酚酸的测定。关键词HPLC;雪莲果;绿原酸;总酚酸中图分类号:R28411/R28412文献标识码:A文章编号:100124454(2009)0220230203雪莲果(Smallanthussonchifolius)系菊科向日(B),二元梯度洗脱程序(0～5min内,A的浓度为葵属多年生草本植物,又称雪莲薯、雪莲子、亚龙果、23%,5～12min内,A的浓度降为18%,12～30min亚贡,是一种纯生态型地下水果。其食用部位为地内,A的浓度降为10%),流速018mL/min,检测波下块茎,味甘,性平,有降压降糖、保护肝脏、滋阴补长326nm。此色谱条件下,绿原酸与其他组分峰分〔1〕肾、增强机体免疫力等作用,并表现出很高的抗离良好,见图1。〔2〕〔3〕氧化性及自由基清除能力。Simonovska等曾用TLC法将雪莲果萃取物及酸解产物进行分离,再通过HPLC/MS分析鉴定,发现其中含有绿原酸、咖啡〔4〕酸、阿魏酸等多种酚酸。Takenaka等也从中分离并鉴定了5种水溶性酚酸衍生物,分别为绿原酸及〔5〕四种咖啡酸二聚体。Yan等在测定雪莲果抗氧化能力的同时,用NMR和MS鉴定了其中主要的酚酸,确定其为绿原酸。探索简便易行的测定方法、掌握雪莲果中各部位的绿原酸及总酚酸的含量,对其药用质量评价及更好的开发利用这一资源具有重要的意义。1仪器与材料Waters600高效液相色谱仪:2487双波长紫外检测器;600E四元泵;Empower色谱工作站;JASCOV2560分光光度仪;FA1604s电子天平;Millipore超纯水仪。雪莲果由大连旅顺园艺试验场提供并鉴定。绿原酸及没食子酸对照品购于中国药品生物制品检定所;甲醇、冰醋酸为色谱纯;其余试剂均为分析纯。图1对照品及供试品的HPLC色谱图A1对照品B1雪莲果样品11绿原酸2方法与结果211绿原酸的HPLC测定21112线性关系考察:精密称取绿原酸对照品1021111色谱分析条件:色谱柱:十八烷基硅烷键合mg,用80%的甲醇水溶液(含1%盐酸)溶解并定容TM硅胶为填充剂,WatersSunFireC18(150mm×416至10mL,摇匀,得对照品储备液,再将其分别稀释mm,5μm),流动相为甲醇(A),1%乙酸水溶液至20、40、80、180、240μg/mL。取上述溶液20μL收稿日期:2008208212作者简介:石晋(19832),女,硕士研究生,主要从事植物化学成分分析方面的研究。3通讯作者:栾雨时,E2mail:luanyushi@yahoo1com1cn。 JournalofChineseMedicinalMaterials第32卷第2期2009年2月·231·注入高效液相色谱仪,按色谱条件测定色谱峰面0104、0106、0108、0110mg/mL,按“21211”项下的方积,以峰面积为纵坐标(Y),对照品进样量(μg)为法测定吸光度。以吸光度A为纵坐标、对照品溶液横坐标(X),进行分析,得线性回归方程:Y=1171×浓度C为横坐标,得回归方程A=6157C(r=106X(r=019990)。绿原酸对照品在014～418μg019990)。表明总酚酸含量在0102～0110μg/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系。范围内,呈现良好线性关系。21113供试品溶液的制备:取雪莲果块茎经自然21213精密度试验:取没食子酸对照品溶液50风干后粉碎,称取1g,置于100mL三角瓶中,用μL,按方法“21211”项下测定5次,吸光度A的RSD80%的甲醇水溶液(含1%盐酸)50mL超声浸提3为1125%,表明精密度良好。次,每次30min。5000r/min离心后45℃下减压旋21214稳定性试验:取同一供试品溶液按上述方转蒸干。残留物溶于2mL提取液,过0122μm微法,分别在反应后每隔5min测定一次吸光度,发现孔滤膜,取续滤液,即得供试品溶液。供试品溶液在1h内稳定,RSD为1143%。21114精密度试验:吸取绿原酸对照品溶液2021215重现性试验:称取雪莲果样品5份,按上述μL,注入高效液相色谱仪,按上述色谱条件进行分方法提取并测定其中总酚酸含量,其RSD为析,测定5次,得到绿原酸对照品峰面积的RSD为1158%,表明重现性良好。1108%,表明精密度良好。21216加样回收率实验:称取已知含量的雪莲果21115稳定性试验:取同一供试品溶液分别在0、样品5份,加入适量没食子酸对照品液,测定其总酚1、2、4、6、8h各进样20μL,测定色谱峰面积,得到酸的含量,计算出平均回收率为96181%,RSD为供试品溶液绿原酸峰面积的RSD为1135%,说明供1164%。试品在8h内保持稳定。3讨论21116重现性试验:取5份雪莲果样品,按311天然酚酸类化合物具有清除自由基、抗菌消〔7〕“21113”项下的方法进行平行提取,测定其含量,结炎、抑制血栓形成等生物活性。作为酚酸类物质果重现性良好,计算得RSD为1156%。的一种,绿原酸具有多种药理作用,对血液、消化系〔8〕21117加样回收率试验:称取已知含量的雪莲果统的多种疾病更有显著疗效,现已成为药材和中样品5份,加入适量绿原酸对照品液,按供试品测试成药制剂内在质量控制的重要指标。根据本实验的方法提取测定,计算得到平均回收率为97128%,测定结果,雪莲果表皮及近表皮处绿原酸及总酚酸RSD为1142%,表明色谱条件具有较强的可靠性。含量远远高于中部,应对这部分资源进行回收及利21118样品含量测定:取雪莲果块茎的三个部位用。(近表皮部、中部及心部),按“21113”项下的方法进312在选择流动相比例时,曾使用甲醇21%乙酸行提取,以选定色谱条件外标法定量,结果见表1。(30∶70)、(25∶75)、(23∶87)等多种比例流动相,这表1雪莲果块茎不同部位绿原些恒梯度流动相不能实现绿原酸同其他组分峰的分酸及总酚酸含量(mg/g)离;而且随流动相极性的增加,各组分分离度增大,取样部位绿原酸含量总酚酸含量保留时间过长;同时当甲醇21%乙酸达到20∶80时,心部012154159一些新的组分峰又被分离出来。根据HPLC分析的中部011622196要求,确定用梯度洗脱程序(0～5min内,甲醇浓度近表皮部01264614823%,5～12min内,甲醇浓度达18%,12～30min212总酚酸的分光光度法测定内,甲醇浓度降为10%)作为绿原酸分析的最佳流21211测定方法:按“21113”项下进行提取,制备动相。该流动相基线平稳,能够实现组分的分离,分〔6〕供试液。采用FC法测定总酚酸含量:取供试品离度良好且保留时间适中。溶液50μL于试管中,加入Folin2Ciocalteu试剂313采用高效液相色谱法和分光光度法测定雪莲1000μL,摇匀后于室温下反应5min,再加入1mol/果中绿原酸和总酚酸的含量,简便、准确,重现性良L的碳酸钠溶液,30℃下反应90min,适当稀释后好,方法可靠,可为雪莲果块茎的药用质量评价提供于725nm波长处测定样品溶液吸光度,再通过标准可靠的检测标准。曲线计算即得总酚酸含量,结果见表1。参考文献21212线性关系考察:称取一定量没食子酸对照品,制备储备液(1mg/mL)将其分别稀释为0102、[1]李卓亚1雪莲果化学成分及其药理作用的研究进展 ·232·JournalofChineseMedicinalMaterials第32卷第2期2009年2月[J]1食品与药品,2007,9(6):41243179327961[2]YanXJ,SuzukiM,Ohnishi2KameyamaM,etal1Extrac2[5]TakasugiM,MasudaT1Three4`2hydroxyacetophenone2re2tionandidentificationofantioxidantsintherootsofyaconlatedphytoalexinsfrompolymniasochifolia[J]1Phyto2(Smallanthussonchifolius)[J]1Journalofagriculturalchemistry,1996,43(55):1019210211andfoodchemistry,1999,47(11):4711247131[6]FaikAA,SemaHA,SengulAK,etal1Phenolicacid[3]SimonovskaB,VovkI,AndrensekS,etal1Investigationcontentsofkale(BrassicaoleraceaeL1var1acephalaofphenolicacidsinyacon(Smallanthussonchifolius)leav2DC1)extractsandtheirantioxidantandantibacterialactiv2esandtubers[J]1JournalofchromatographyA,2003,ities[J]1Foodchemistry,2008,107(1):1922511016(1):892981[7]齐典,金哲雄1植物多酚在保健食品方面的应用[J]1[4]TakenakaM,YanXJ,OnoH,etal1Caffeicacidderiva2黑龙江医药,2006,19(2):12021221tivesintherootsofyacon(Smallanthussonchifolius)[J]1[8]张鞍灵,马琼,高锦明,等1绿原酸及其类似物生物活Journalofagriculturalandfoodchemistry,2003,51(3):性[J]1中草药,2001,32(2):17321761RP2HPLC同时测定天山花揪中绿原酸、芦丁和金丝桃苷含量3芮鸣,张芹,唐辉,王鲁石,马运芳(新疆特种植物药资源省部共建教育部重点实验室,新疆石河子832002)摘要目的:建立HPLC同时测定天山花揪中绿原酸、芦丁和金丝桃苷3种成分含量的方法。方法:用60%的乙醇超声提取,WatersC18(250mm×416mm,5μm)色谱柱,以甲醇2乙腈-013%磷酸水为流动相进行梯度洗脱,检测波长360nm,柱温25℃。结果:绿原酸、芦丁和金丝桃苷分别在33112～11519,11051～11156,018040～81844μg/mL浓度范围内呈良好的线性关系,相关系数均为019999;平均加样回收率(n=3)分别为98187%、10012%、10110%。经测定天山花揪叶中绿原酸、芦丁和金丝桃苷含量分别为11271%、0108884%、011430%。结论:本法一次性同时测定天山花揪中3种成分含量,方法简便、准确、可靠,可为药材和制剂研究提供较为全面的科学依据及有效的质量控制方法。关键词天山花揪;绿原酸;芦丁;金丝桃苷;高效液相色谱中图分类号:R28411文献标识码:A文章编号:100124454(2009)0220232203天山花揪SorbustianshanicaRupr1为蔷薇科花高效液相色谱方法,现报道如下。揪属植物,系新疆维吾尔族和哈萨克族民间用药,1仪器与材料《新疆维吾尔自治区药品标准》(第一册)记载:“民111仪器Agilent1100型高效液相色谱系统(配间以嫩枝叶、果实和茎皮入药。嫩枝叶和茎皮:味有:四元泵,紫外检测器,HP1100化学工作站);日苦,性寒,无毒;果实:味甘苦,性平。功能:清热利本岛津UV2401(PC)紫外光谱仪;德国Sartorius肺,补脾生津,止咳;主治:肺结核,哮喘,咳嗽,胃炎,BP211D十万分之一电子分析天平;超声清洗仪。〔1〕胃痛,维生素A和C缺乏症”。该属植物中含有112材料绿原酸、芦丁和金丝桃苷对照品(由中较丰富的黄酮、花青素、双联苯酚、类山梨酸苷、生氰国药品生物制品检定所提供);天山花揪供试品采〔224〕〔5〕〔6,7〕〔8〕苷等成分。具有抑菌、抗氧化、抗癌、抗自新疆玛纳斯林场,海拔2000～2500m,由石河子〔9〕辐射和止咳平喘、依赖性地抑制心肌收缩和保护大学药学院成玉怀高级实验师鉴定为蔷薇科花揪属〔10〕心肌缺血等作用。为了更好的分析天山花揪的植物天山花揪SorbustianshanicaRupr1;甲醇、乙腈有效成分,及对药材质量进行控制,笔者建立了同时为色谱纯,水为纯净水,磷酸、乙醇及其它试剂均为测定天山花揪叶中绿原酸、芦丁和金丝桃苷含量的分析纯。收稿日期:2008207222基金项目:新疆建设兵团科技攻关计划医药卫生专项资金资助项目(2006GG52)作者简介:芮鸣(19812),男,硕士研究生,从事天然药物分析及制剂研究。3通讯作者:唐辉,Tel:099322057167,E2mail:th_pha@shzu1edu1cn。