流式细胞术系列之白血病免疫分型课件

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1、流式细胞术在白血病免疫分型中的应用白血病细胞起源、分化和生物学行为不同，构成了白血病的异质性，因此急性白血病的全面、正确分型是准确、及时治疗的前提。急性白血病的分型基本上分三个阶段：FAB分型(1976)(morphology，M)MIC分型（1986）(morphology，M)(immunology，I)(cytogenetics，C)WHO分型(2001)（MICM）(morphology，M)(immunology，I)(cytogenetics，C)(molecularbiology,M)急性白血病分

2、型历史急淋（ALL）急性白细胞FAB分型急非淋（ANLL）急性髓细胞白血病(AML)L1型L2型L3型M0:微分化型髓系白血病；M1：未分化的原粒细胞白血病；M2：部分分化的原粒细胞白血病；M3：急性早幼粒细胞白血病；M4：急性粒、单核细胞白血病；M5：急性单核细胞白血病；M6：急性红血病或红白血病；M7：急性巨核细胞白血病。MIC分型以形态学为基础、免疫学和细胞遗传学作补充，相互结合，使分型更趋精确。其中免疫学分型是另外两种方法的重要补充。MIC分型形态学(morphology，M)：传统的骨髓片检查免疫学(im

3、munology，I)：免疫组化流式细胞术细胞遗传学(cytogenetics，C)：染色体分型流式细胞术白血病免疫分型优点流式细胞仪可方便、快速、准确地完成白血病的免疫学分型，其意义在于：准确寻找和计数幼稚或异常的细胞群体；用形态学、细胞化学染色不能肯定细胞来源的白血病；形态学为急性淋巴细胞白血病（ALL），但缺乏特异性淋巴细胞系列抗原标记；混合性白血病；帮助确定髓系白血病所属类型；慢性淋巴细胞白血病/淋巴瘤；微小残留白血病。利用荧光素标记的单克隆抗体鉴定细胞表面或细胞内的免疫标志，可准确反映白血病细胞的所属系列

4、（TB髓）及分化程度。检测分析时，首先根据CD45表达强弱和细胞颗粒度，在CD45-SSC图中确定幼稚或异常的细胞群体。然后分析检测各种标志的表达情况及其阳性率。白血病免疫分型原理CD4、CD8、CD61、CD56、CD38本实验室现有的白血病免疫分型抗体组合CD3CD79aMPO可以确定白血病分别属于T/B/髓系表面染色胞内染色T系：CD2、CD5、CD7B系：CD10、CD19、CD20髓系：CD11b、CD13、CD14、CD15、CD33非系列特异的抗体：CD34、HLA-DR全套进一步细分其它必要

5、时可以加用泛白细胞标志：CD45标本来源（1）外周血（2）骨髓穿刺液，（3）骨髓活检标本（4）淋巴组织穿刺样本保存要求：室温条件(16℃-28℃)存放；如非液态标本，则要在标本中加入足量的等渗液体（如生理盐水或组织培养液）。保存时间肝素抗凝的外周血和骨髓标本，存放时限为48～72小时；EDTA抗凝标本，存放时限只有12～24小时，因为髓细胞在此条件下会裂解；柠檬酸（ACD）抗凝的外周血标本可存放72小时以上。但此方法不推荐用于骨髓穿刺标本，因为高浓度的ACD会引起pH值变化而导致骨髓细胞死亡正常骨髓流式分析图CD4

6、5/SSC图中可见：CD45强阳性SSC低信号的细胞群为淋巴细胞(褐色细胞群体)中等强度的CD45表达SSC信号最强的细胞群体为粒细胞(蓝色及红色细胞群体)CD45表达与SSC信号介于淋巴细胞与粒细胞之间的是单核细胞群体(绿色细胞群体)CD45阴性SSC信号最低的有核红细胞和细胞碎片根据骨髓细胞CD45/SSC图中分布情况设门圈定各类细胞R1门为成熟淋巴细胞R2门为正常单核细胞位置R3门正常粒细胞位置R4门为幼稚淋巴细胞出现位置R5门为有核红细胞或细胞碎片位置R6门为幼稚髓细胞出现位置白血病细胞通常会在R4R6两门

7、位置处出现T-ALL在CD45/SSC点图中，幼稚细胞群体低SSC信号，与成熟淋巴细胞比较CD45弱表达白血病流式免疫分型举例CD5、CD7、cCD3、CD34阳性B-ALL在CD45/SS点图中，幼稚细胞群体低SSC信号，与成熟淋巴细胞比较CD45弱表达CD19、CD20、CD10、cCD72、CD34、HLA-DR阳性AML-M0幼稚细胞群体的FSC和SSC信号低，在CD45/SSC点图中特征性地与幼稚淋巴细胞区域相连，Blasts>90%。CD13和/或CD33阳性，CD34、HLA-DR通常阳性，缺乏髓系成

8、熟分化抗原：CD11B，CD15等，有时会表达CD7或CD4；MPO阳性率一般小于3%。AML-M1幼稚细胞群体的FSC和SSC信号与M0相似，Blasts>90%。CD13和/或CD33阳性HLA-DR阳性CD34阳性CD11B，CD15等(+/-)>3%的幼稚细胞表达MPO。此类型白血病细胞除了占优势的幼稚细胞外还存在已明显分化的细胞群体，至少已分化至早