进行性肌营养不良课件_13

《进行性肌营养不良课件_13》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、杜氏（DMD)进行性肌营养不良515喻枫陈玲徐冬冬吴翠萍王冠佩方荧进行性肌营养不良症，是一种随着年龄增长，肌肉逐渐萎缩，使行动能力渐渐消失，直至完全丧失生活自理能力的疾病。患者最终只能眼睁睁地等待着自己由于心肌衰竭而死亡，国际医学界形象地称之为“渐冰人”。该病症已被(国际七三学社)列入十大医学课题进行研究。Duchenne肌营养不良又称假肥大型肌营养不良、杜氏肌营养不良，为X连锁隐性遗传的疾病。年发病率约为每3500个活产男婴中有1个。致病基因DMD位于Xp21，男性发病，女性为致病基因携带者。DMD患儿一般

2、3~5岁出现肌无力症状，病情进行性加重，大约12岁左右失去独立行走能力，20岁左右由于肌无力、呼吸衰竭而死亡。DMD的研究进展及困难肌营养不良多数预后不良，最终可以导致患儿的伤残和死亡。目前，尚无根治方法，主要是对症和支持治疗。适当的康复训练，适时应用康复支具支撑患儿的肢体，尽可能保持和延长患儿独立行走的能力。小剂量皮质类固醇激素可以降低肌酸磷酸肌酶水平，但不能阻止疾病的进展。基因替代治疗和小分子治疗方法仍在实验阶段，有望在将来改善疾病的预后。一、病毒导入剪裁后的Dystrophin基因概括来说，就是利用不直

3、接引起人类疾病，免疫原性较小的腺病毒为载体，导入人工剪裁的，去除大部分杆状区序列和羧基端序列的minidystrophin基因。AAV具有多达上百种血清型，广泛用于多种疾病的基因治疗，针对肌营养不良，选用对肌肉细胞有亲和性的血清型（AAV-1，AAV-2等）经过基因工程重组后作为载体，转载入约4Kbminidystrophin序列。将得到的重组子注入小鼠体内。腺病毒（AAV）载体选作基因载体的是腺相关病毒（AAV），该病毒是目前用作基因载体的最小的病毒，但是他是最安全的，不会患上人类任何一种已知的疾病；其他一

4、些用作基因载体的病毒，可能会造成炎症，引起人体强烈的免疫反应，将载体和它所携带的健康的基因一起剔除。法国的研究者已经证实了腺相关病毒（AAV），不会引起这种危险。小鼠实验及人体实验在mdx小鼠（公认的DMD动物模型）中取得良好治疗效果后，在美国进行了Ⅰ期临床试验，共对6名DMD患儿行一侧肢体超声引导下肌内注射，观察24个月，主要验证安全性，结果未发现严重不良反应。病毒导入剪裁后的Dystrophin基因的优点在于：无论DMD基因缺陷为何种类型，均可通过导入外源替代基因恢复或部分恢复功能。主要缺点则包括：1、病

5、毒载体存在一定风险，如自身复制、免疫激活、插入染色体致突变、致癌等，如需通过循环系统全身注射，需要相当大的病毒载量，风险更高；2、病毒载体导入基因表达不稳定，并随时间快速递减，不能持续稳定表达；3、AAV病毒载量有限，无法携带完DystrophinmRNA，经剪裁的minidystrophin虽可替代大部分功能，但仍会遗留轻的临床症状。AAV病毒载量有限问题的克服迷你型抗肌萎缩蛋白是比微型抗肌萎缩蛋白稍大的蛋白，大约是全长抗肌萎缩蛋白的一半，但是即使是这样尺寸的抗肌萎缩蛋白也无法直接装入腺相关病（AAV）。为

6、了解决这一难题的方法是将这一抗肌萎缩蛋白基因切成二半，分别装入两个腺相关病毒（AAV）载体中，然后将两个载体同时注入实验鼠的肌肉细胞。如果切得正确，两条分开的抗肌萎缩蛋白基因会在进入肌肉细胞后重新组合起来，开始翻译抗肌萎缩蛋白。将这一双基因载体注射到杜氏进行性肌营养不良实验鼠的大腿肌肉后，发现这些实验鼠40%的肌肉纤维中有迷你型抗肌萎缩蛋白分子的存在，这些迷你型的抗肌萎缩蛋白增加了肌肉纤维的力量同时也保护了肌肉纤维不受到损害。二、外显子跳跃（ExonSkipping）正是由于包含24个重复序列的杆状区去除部分

7、仍可保存大部分蛋白功能，而在前mRNA剪切过程中，可利用反义寡核苷酸链跳过相应外显子区域，使由缺失打乱的读码框恢复正常，获得裁短的部分dystrophin蛋白，承担大部分功能。这种带有修补功能的外显子叫分子补丁。外显子跳越技术或者叫做基因分子补丁治疗的目的是鼓励细胞RNA的剪接机理，让其越过抗肌萎缩蛋白基因中存在着基因突变的部分。具体的机理是用一段短的脱氧核糖核酸，叫做反义寡聚核苷酸(AOs)，或者叫做分子补丁molecularpatches遮住抗肌萎缩蛋白基因上的需要被跳越的部分，目的是为了让RNA核糖体在

8、阅读基因信息翻译成蛋白质时，忽略这一部分，这样就恢复了基因阅读框，可以合成被截短的但是有一定功能的抗肌萎缩蛋白，AVI-4658是专门设计来跳越抗肌萎缩蛋白基因上的51号外显子，忽略51号外显子后，大约对13%左右的杜氏进行性肌营养不良患者有治疗作用。DMD在X染色体上突变的方式导致DMD最常见的突变是外显子45至52之间的缺失突变，而外显子51的起始部分三核苷酸密码子并不完整，需要与外显子50最后